发布时间:2020-06-29 10:23 原文链接: 全自动组织处理器处理小鼠脾脏

注意:gentleMACSTM Dissociators的使用细节可参考厂家说明书

注意:在本文所展示的结果中,每个gentleMACS C管解离一个脾脏

 

1. 将小鼠脾脏加入含有PEB缓冲液的gentleMACS C管中:

   1-2个小鼠脾脏:3ml

   3-4个小鼠脾脏:6ml

   5-6个小鼠脾脏:9ml

2. 拧紧C管管盖,将其倒置于gentleMACS Dissociator上

  注意:拧紧C管超过第一道阻力点

  注意:确保样品材料位于转子/定子区域

3. 选择并运转以下程序之一:

  1–2 mouse spleens: m_spleen_01

  3–6 mouse spleens: m_spleen_04

4. 程序终止后,将C管从gentleMACS Dissociator 中取出

5.(可选)瞬时离心,收集管底样本

6. 重悬样本,将细胞悬液通过MACS SmartStrainer(70μM)过滤至15ml离心管中(1-2个小鼠脾脏/C管)或50ml离心管中(3-6个小鼠脾脏/C管)


注意:MACS SmartStrainer使用之前先用2ml缓冲液过滤一次

注意:C管管盖中心有隔膜密封的小口,可通过这个小口将解离的组织从C管中移取出来(使用1000μl的移液枪)

7. 用5ml缓冲液清洗滤器

8. 弃滤器,细胞悬液300g室温离心10min;完全弃去上清

9. 用PEB缓冲液重悬细胞至合适体积用于后续的流式细胞染色