关于人脑微血管内皮细胞的传代培养介绍

　　1、人脑微血管内皮细胞的传代培养— 细胞达到90%融合时进行传代培养。

　　2、人脑微血管内皮细胞的传代培养— 传代培养的前一天准备纤维连接蛋白包被的培养瓶(2 μg/cm2)。

　　3、人脑微血管内皮细胞的传代培养— 将培养基，胰酶/EDTA消化液，胰酶中和液和DPBS(磷酸盐缓冲液) 加热至室温。我们不推荐在使用前用37°C水浴加热试剂和培养基。

　　4、人脑微血管内皮细胞的传代培养— 用DPBS冲洗细胞。

　　5、人脑微血管内皮细胞的传代培养— 用10 ml胰酶/EDTA消化液消化细胞(以T-75培养瓶为例)，直到80%细胞呈现圆形(在显微镜下观察)。立刻加入10 ml 胰酶中和液并轻轻摇动培养瓶。

　　注意：应用ScienCell研究室的胰酶/EDTA消化液能使由于过度消化导致的细胞死亡降到最小程度。

　　6、人脑微血管内皮细胞的传代培养— 收取细胞并将其移入50ml离心管中。另外用10ml生长培养基冲洗培养瓶以收集残留的细胞。在显微镜下观察剩余细胞数量以确定是否收集成功。剩余细胞数应小于5%。

　　7、人脑微血管内皮细胞的传代培养— 以1000转/分（1000rpm）离心收取的细胞悬液5分钟，然后在生长培养基中重悬细胞。

　　8、 人脑微血管内皮细胞的传代培养— 计数细胞，然后将它们以推荐的细胞密度接种在新的纤维连接蛋白包被过的培养瓶中。