十二指肠引流液应在空腹时采取，以尽可能减少胃液的干扰。在空腹状态下使用双腔管，可以分别采取胃液和十二指肠引流液，以尽可能地防止胃液流入十二指肠。
十二指肠引流液一般指十二指肠液、胆总管液、胆囊液和肝胆管液的总称。由于以上各液共同排泌于十二指肠，故很难得到单一的纯分泌物。
将灭菌的十二指肠引流液管经口咽下，先抽空胃液后以温水灌洗胃腔并抽出洗液，病人取可卧位，臂部垫高，现再缓缓送进引流管，当第二标记达到基本建设牙后再送进少许，边送边抽，当抽出淡黄色清晰，碱性液体量表示引流管尖头已进入十二指肠，当引流管进到第三标记达切牙时，固定引流管，庆液体自然流出，此液即为D液，应使其流尽或抽尽，收集留于标记D胆汁瓶。
当流完D液后，从引流管缓慢注入温硫酸镁液（330g/L）50-100ml用止血钳夹紧引流管，促使Oddi括约肌松弛。10分钟后放开止血钳，先用注射器轻轻抽取，引导液体自然流出，把首先流出的硫酸镁溶液弃去当有淡黄色液体流出时即为胆总管胆汁，一般流量为10-20毫升，收集于A胆汁瓶中。
继续引流应流出棕褐色粘稠液体是为胆囊胆汁一般量为30-60毫升，胆量囊有病变时可影响B胆汁量。
再继续引流，当流出柠檬黄色稀薄液体时即为肝胆管胆汁，以后不再变色，当C胆汁流出量足够检查时即终止引流，将引流管拔出。A、B、C、D液均需送检。当做细菌检查时，各液均需以无菌技术留取。