发布时间:2024-08-27 14:00 原文链接: 关于孤雄单倍体胚胎干细胞的建立的介绍

  2012年,中国科学院上海生物所的Yang等在Cell杂志上发文报道源自小鼠的孤雄单倍体细胞(androgenetic haploid embryonic stem cells, AG-haESCs)的成功建立。Yang等 [4]采用了两种方式来建立AG-haESCs。

  第一种方式通过核移植(nuclear transfer, NT)完成。Yang等将Oct4-EGFP转基因小鼠(C57BL/6背景)的单倍体精子的头部转移进入了移除了细胞核的卵母细胞中,注意到他们并没有采用体细胞而是卵母细胞。通过Hoechst染色可以发现精子的头部发生了解聚化,同时由于加入的5-羟甲基胞嘧啶(5-hydroxymethylcytosine, 5 hmC)信号使得DNA发生了甲基化。这反映了供体核在去核卵母细胞中发生了重构化反应。最终,约有21%的细胞形成了囊胚期细胞。去除掉透明层(zona pellucida)后,Yang等将囊胚在基于Leeb等采用的2i介质的标准ESC培养系统中培育。在产生的34个胚胎干细胞系中,通过FACS技术循环筛选有4个细胞系(命名为AGH-OG-1到AGH-OG-4)能够保持单倍性。

  Yang等采用的第二种方式没有采用NT技术。雄性Actin-EGFP转基因小鼠精子首先使卵子受精;在核融合之前,剔除卵母细胞的雌原核(pronucleus),然后就得到了只含来自精子的染色体组——即通过精子与卵子的受精作用“替代”了核移植技术。然后通过相同的2i体外培养技术获得了一个孤雄单倍体胚胎干细胞系(AGH-EG-1)。