照高效液相色谱法（2010年版药典二部附录ⅤD）测定。
1、色谱条件与系统适用性试验：
用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（pH值适应范围大于8.0）；以0.02mol/L磷酸盐缓冲液（取磷酸二氢钾2.72g与氢氧化钠0.75g，加水1000ml使溶解，调节pH值为8.0）－乙腈（35：65）为流动相；检测波长为240nm。盐酸布比卡因峰与相邻杂质峰的分离度应符合要求。
2、测定法：
精密量取布比卡因适量，加流动相稀释制成每1ml中约含25μg的溶液，精密量取20μl注入液相色谱仪，记录色谱图；另取盐酸布比卡因对照品同法测定。按外标法以峰面积计算，即得。