1、孕妇及哺乳期妇女用药
本品可穿过胎盘屏障进入胎儿组织，有引起胎儿听力损害的可能，孕妇禁用。本品在乳汁中分泌量很少，但通常哺乳期妇女在用药期仍应暂停哺乳。
2、儿童用药
庆大霉素属氨基糖苷类，在儿科中应慎用，尤其早产儿及新生儿，因其肾脏组织尚未发育完全，使本类药物的半衰期延长，易在体内积蓄而产生毒性反应。少儿、婴儿、新生儿听力的下降不易观察到，因此禁用于该类人群。
3、老年患者用药
老年患者的肾功能有一定程度的生理性减退，即使肾功能测定值在正常范围内，仍应采用较小治疗量。老年患者应用本品后较易产生各种毒性反应，应尽可能在治疗过程中监测血药浓度。