1、明胶酶谱法实验步骤：取对数期的癌细胞在的无血清培养基DMEM中培养24h。
2、明胶酶谱法实验步骤：次日收集上清液，将上清液移入离心管中 2000rpm 离心10min，-70℃储存备用。
3、明胶酶谱法实验步骤：根据细胞计数调整各组细胞培养上清液中的蛋白浓度（或者测定蛋白浓度调整使所上蛋白总量一致）。与5×上样缓冲液混合，12ul样本+4ul上样缓冲液。（不要用枪用力吹打，防止出现过多气泡）
4、明胶酶谱法实验步骤：配制分离胶和浓缩胶，16ul/孔上样（根据表达强度和蛋白浓度确定上样量），4℃进行SDS-PAGE 电泳100V约1.5小时（电泳时在周围敷上冰，有利于使条带跑直）。
5、明胶酶谱法实验步骤：电泳结束后,将凝胶置于洗脱液(2.5% Triton X-100，50mmol/L Tris -HCl ，5mmol/L CaCl2，pH7. 6) 中振荡洗脱2次,每次40分钟,然后用漂洗液(除不含Triton X -100 外其余同洗脱液) 漂洗2次,每次20分钟,接着,将凝胶置于孵育液( 50mmol/L Tris -HCl , 5mmol/L CaCl2 , 0. 02% Brij-35 ,pH7.6) 中37℃ 孵育42h。
6、明胶酶谱法实验步骤：孵育结束后经染色液(0.05% Coomassic 亮蓝、30%甲醇、10%乙酸) 染色3h,及脱色液A、B、C(甲醇浓度分别为30%、20%、10 % ,乙酸浓度分别为10 %、10 %、5%) 分别脱色0.5、1、2h后，显示出MMP-2（72KD） 和MMP -9（92 KD）为位于蓝色背景上的透亮带，用凝胶图像分析系统分析读取条带面积，宽度和灰度值，做统计分析。