照高效液相色谱法(附录Ⅴ D)测定。
色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键硅胶为填充剂，以水-甲醇（95∶5）为流动相，检测波长为214nm。取硫酸羟脲5mg与盐酸羟胺0.1g，置50ml量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度（临用现配，放置30分钟使用），取20μl注入液相色谱仪，盐酸羟胺峰与羟基脲峰的分离度应大于1.0。理论板数按羟基脲峰计算不低于3000。
测定法： 取硫酸羟脲约100mg，精密称定，置100ml量瓶中，加流动相使溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取20μl注入液相色谱仪，记录色谱图；另取羟基脲对照品约100mg，精密称定，同法测定。按外标法以峰面积计算，即得。