关于硫酸软骨素钠的含量测定介绍

　　照高效液相色谱法（附录V D）测定。

　　色谱条件与系统适用性试验 用强阴离子交换硅胶为填充剂，以pH 3.5的水为流动相A，以pH 3.5的2mol/l，氯化钠溶液为流动相B，按下表进行线性梯度洗脱，流速为1.0ml/min，检测波长为232nm。硫酸软骨素B、硫酸软骨素C和硫酸软骨素A的分离度均应符合要求（组分流出顺序为硫酸软骨素B、硫酸软骨素C和硫酸软骨素A）。

　　对照品溶液的制备 精密称取经105℃干燥至恒重的硫酸软骨素钠对照品0.1g，置10ml的量瓶中，用水溶解并稀释至刻度，摇匀，0.45&micro；m的滤膜过滤，作为对照品溶液。

　　供试品溶液的制备 取本品约0.1g，精密称定，置10ml的量瓶中，用水溶解并稀释至刻度，摇匀，0.45&micro；m的滤膜过滤，作为供试品溶液。

　　测定法 量取对照品溶液与供试品溶液各100&micro；l，各取两份，分别置具塞试管中，各加入50mmol/l三羟甲基氨基甲烷缓冲液（取三羟甲基氨基甲烷6.06g与三水乙酸钠8.17g，用水溶解成900ml，用盐酸试液调节pH至8.0，加水至1000ml，即得）800&micro；l，充分混匀后，加入软骨素ABC酶液（称取适量，用50mmol/l三羟甲基氨基甲烷缓冲液稀释成每1&micro；l含0.001单位后使用）100&micro；l后，摇匀，置于37℃水浴中反应1小时，取出，在100℃加热5分钟后，用冷水冷却至室温，以10000转/分钟离心20分钟，取上清液，0.45&micro；m的滤膜过滤，分别得对照品溶液和供试品溶液的测定液，精密量取20&micro；l注入液相色谱仪，记录色谱图。按外标法以硫酸软骨素A、B和C的面积之和计算硫酸软骨素的含量。