关于细胞铺板试验操作技巧！

做细胞生物学试验，细胞铺板大概是常见的一个试验。但是有很多人不是很得办法，铺得不是很均匀：要么中心密周围稀，要么周围密中心秃顶。怎么办呢？

一般 96 孔板，每孔是加 100 微升细胞悬液，从孔的左面接近底部参加，加完半边板后，将未加的细胞悬液混一下再继续加剩下的半边板子，都加完后盖上盖子，左手悄悄扶住板的左面，右手悄悄敲击板的右边际，注意把握力度（我一般轻巧敲三下），太强或次数太多会导致细胞会集成堆，将板顺时针旋转（逆时针效果不好），依次敲击剩下三个边，静置约 5 分钟，放入 37 度培育箱。

6 孔板、12 孔板或 24 孔板，均可选用将个孔参加少数无血清培育基，晃动滋润整个孔底，然后用移液枪吸至第二孔，相同办法滋润孔底，其它孔一次类推，这样整个孔底都是湿润的，细胞悬液会平铺在整个孔底，加细胞悬液的时分能够避免加在中心，中心细胞多，而加在周边晃匀后会呈现周边细胞多中心少的现象，细胞涣散较均匀，注意加完细胞悬液后要放工作台静置一下。

细胞悬液加完后，将细胞培育板抬高，对着灯光，从底部往上看，看细胞有没有抱团。然后从底部敲击，使之涣散。假如试验室有平板振荡器的话，建议用这个仪器稍振荡一下，效果不错，振幅小，频率高。

细胞要尽量打散，大部分呈单个状态。离心后，要充沛悬浮。还有转移到六孔板后，需求晃动，晃的时分-好不要让细胞液转圈，不然细胞就全被带到中心去了，就会不均匀。

一瓶细胞长满后，正常处理，在培育瓶里吹匀，然后铺 6 孔板，每孔 2 毫升，铺完之后不必调查直接用酒精棉擦拭，然后放到培育箱里，轻微的左右前后各三圈。基本上 24 小时之后再调查，每孔的细胞都会很均匀。

计算好所需求的悉数液体量和细胞量，混匀后，加到六孔板里，六孔板按横 8 字型晃，显微镜下调查，假如不均匀，按上述办法再晃。假如细胞未计数直接种的话，在种六孔板的过程中，随时晃一下混匀用的瓶子。

放在水平板面上先上下移动，再左右移动，每个方向 5 到 6 次，但要害的是摇晃后-好直接放入培育箱中，不要再做过多的运动，例如放到镜下去看，不然很简单就又聚到中心去了。