1、酶活力
照紫外-可见分光光度法(通则0401)测定。
供试品溶液:取本品适量,精密称定,加纯度项下的磷酸盐缓冲液(pH7.0)适量使溶解并定量稀释制成每1mL 中约含10单位的溶液。
标准品溶液:取胰激肽原酶标准品,按标示单位,加上述磷酸盐缓冲液(pH7.0)适量使溶解并定量稀释制成每1mL中含10单位的溶液。
底物溶液:取N-苯甲酰-L-精氨酸乙酯盐酸盐17.7mg,加三羟甲基氨基甲烷缓冲液(称取三羟甲基氨基甲烷12.14g,加水800mL溶解,用6mol/L盐酸溶液调节pH值至8.0,用水稀释至1000mL)适量使溶解并稀释至100mL,4°C保存。
测定法:取25℃±0.5℃水浴中预热的底物溶液2.5mL,置1cm比色池中,分别精密加入供试品溶液或标准品溶液 0.1mL,混匀,立即计时,使比色池内的温度保持在25℃±0.5℃,在253nm波长处,以底物溶液为空白,准确读取1分钟时的吸光度A0和3分钟时的吸光度A,标准品溶液和供试品溶液需平行测定3次,分别求得标准品溶液和供试品溶液的ΔA值(6ΔA=A-A0)的平均值。
2、蛋白含量
取胰激肽原酶约10mg,精密称定,照蛋白质含量测定法(通则0731第一法)测定,即得。
3、比活
由测得的酶活力和蛋白含量计算每1mg蛋白中含胰激肽原酶的单位数,即得。