常用的酶联合吸附测定有双抗体夹心法和间接法，前者用于检测大分子抗原，后者用于测定特异抗体。
一、间接ELISA
本法主要用于检测抗体。间接ELISA的操作程序如下。
(1) 材料
① 包被液、洗涤液、保温液、底物液、终止液；
② DVH包被抗原、酶标抗抗体、阴性及阳性DVH参考血清.
③ ELISA检测仪、加样器、聚苯乙烯微量板。
(2) 方法步骤
① 加抗原包被 → 4℃过夜，洗涤三次、抛干
② 加待检血清 → 37℃ 2小时，洗涤三次、抛干
③ 加酶标抗体 → 37℃ 2小时，洗涤三次、抛干
④ 加底物液
→ 37℃ 30分钟，加终止液
⑤ 用ELISA检测仪测定OD值，并计算出P/N比值。
二、双抗体夹心ELISA
本法主要用于检测大分子抗原。
(1) 加抗体包被 → 4℃过夜，洗涤三次、抛干
(2) 加待检抗原 → 37℃ 30分钟，洗涤三次、抛干
(3) 加酶标抗体 → 37℃ 30分钟，洗涤三次、抛干
(4) 加底物液
→ 37℃ 15分钟，加终止液
(5) 用ELISA检测仪测定OD值。