关于黄曲霉的检测—免疫亲和柱荧光分光光度法和免疫亲和术hplc法

　　免疫亲和柱法和酶联免疫吸附法虽然都可达到速简便效果，但酶联免疫吸附法仅能检测单一毒素（如黄曲霉毒素b1）含量，而且易出现假阳性结果，难以控制。免疫亲和柱法（包括荧光光度法和hplc法）却能达到既定量准确又快速简便的要求。

　　免疫亲和柱的使用可以避免传统tlc和hplc的缺点，同时免疫亲和柱与tlc和hplc法结合可以大大提高工作效率，提高灵敏度和准确度。

　　黄曲霉毒素免疫亲和柱-荧光光度计法是以单克隆免疫亲和柱为分离手段，用荧光计，紫外灯作为检测工具的快速分析方法。它克服了tlc和hplc法在操作过程中使用剧毒的真菌毒素作为标定标准物和在样品预处理过程中使用多种有毒，异味的有机溶剂，毒害操作人员和污染环境的缺点。同时黄曲霉毒素免疫亲和柱-荧光光度计法分析速度快，一个样品只需10-15min,比传统方法快几个小时甚至几天时间；仪器设备轻便容易携带，自动化程度高，操作简单，直接读出测试结果，可以在小型实验或现场使用。可以进行黄曲霉毒素总量 (b1b2g1g2) 的测定，检测限可达到1ug/kg,达到黄曲霉毒素标准限量值以下测定范围为1-300ug/kg。

　　黄曲霉毒素免疫亲和柱-高效液相色谱法比传统的hplc法更加安全，可靠，灵敏度和准确度高。它采用单克隆抗体免疫技术，可以特效性地将黄曲霉毒素或其他真菌毒素分离出来，分离效率和回收率高。

　　分析原理试样中的黄曲霉毒素用一定比例的甲醇/水提取液经过过滤，稀释后，用免疫亲和柱净化，以甲醇将亲和柱上的黄曲霉毒素淋洗下来，在淋洗液中加入溴溶液衍生，以提高测定灵敏度，然后用荧光分光光度计进行定量。也可以将甲醇-黄曲霉毒素淋洗液的一部分注入hplc中，对黄曲霉毒素b1,b2,g1,b2分别进行定量分析。免疫亲和柱是用大剂量的黄曲霉毒素单克隆抗体固化在水不溶性的载体上，然后装柱而成。该方法的测定范围0-300ug/kg。