O157∶H7大肠杆菌菌株不发酵或在2天内不发酵山梨醇，而90%以上的其他大肠杆菌发酵山梨醇。O157∶H7大肠杆菌含有H7抗原，而90%以上的其他血清型大肠杆菌无H7抗原。March等[9]用1%的山梨醇取代麦康凯琼脂中的乳糖，用此培养基从患者粪便中分离出O157∶H7大肠杆菌，并命名为SMAC培养基，该菌在此培养基上为无色菌落，而其他大肠杆菌呈粉红色菌落。此试验存在一定局限性。有人用H7抗血清-山梨醇发酵培养基、快速MUG试验及溴麝香酚蓝(BTB)抑制试验等来诊断O157∶H7大肠杆菌，其目的均为提高特异性及敏感性。
Padhye等[10]用单克隆抗体MAB4E8C12进行直接ELISA试验检测O157∶H7大肠杆菌，除了O26∶H11外，未发现与沙门菌、耶尔森菌、志贺菌、沙雷菌和肺炎克雷伯菌等有交叉反应。表明该法有明显特异性，可作为一种有用的免疫试剂用于临床和食物标本的快速检测。最近，有人用单克隆抗体作诊断试剂直接用于粪便标本快速检测该菌，有较好的实用价值[11]。
Levine等[12]制备一对DNA探针-CVD419，该探针为O157∶H7大肠杆菌菌株质粒DNA的一段3.4kb HindⅢ酶切片段。用原位杂交法检查107株O157∶H7大肠杆菌，106株与探针发生阳性反应，敏感性为99%，他们用此探针检测临床株69株，敏感率为99.8%，特异性较高。近年来，国内外学者根据O157∶H7大肠杆菌hly AB基因的DNA序列，设计PCR引物，成功地应用PCR法检测O157∶H7大肠杆菌，其敏感率为100%，特异性极高[13]。
关于Vero毒素的检测，报道方法较多，因为此毒素并非O157∶H7大肠杆菌所独有，因而Vero毒素的检测主要用于流行病学调研，对临床实验诊断意义不大[5，14]。