再生障碍性贫血患者T细胞亚群及细胞因子的检测

　摘要　为了探讨再生障碍性贫血(再障)的免疫发病机制，阐明细胞免疫、细胞因子在再障患者中的变化。本文采用APAAP法和ELISA分别检测再障患者及正常人外周血T细胞亚群、PBMC经PHA培养上清中IL-2、IL-3和IFNγ水平。结果表明，再障患者外周血CD3、CD4、CD4/CD8降低，CD8升高；IL-2、IFNγ水平升高，IL-3水平降低。相关分析发现CD8与IL-3呈负相关，而与IFNγ呈正相关。据此认为细胞免疫功能异常及细胞因子网络失调在再障发病中起一定作用。 
　　关键词　再生障碍性贫血　　细胞因子　　T细胞亚群

　　现知细胞免疫功能紊乱与造血功能衰竭密切相关［1］。T淋巴细胞及其产生的淋巴因子白介素-2(IL-2)、白介素-3(IL-3)和γ干扰素(IFNγ)在造血和免疫调节过程中起着重要的作用。本文测定再障患者T细胞亚群、PBMC经PHA培养上清中IL-2、IL-3和IFNγ的水平，以探讨T细胞亚群及上述细胞因子与再障发病关系及临床意义。

材　料　和　方　法

　　一、　研究对象　临床确诊的再障成年患者50例，病程1～26年。其中治疗后症状未见明显改善者30例，治疗后已取得显著疗效并处于恢复期者20例。健康成人对照组20名。 
　　二、　方法 
　　1.按常规分离外周血单个核细胞(PBMC)并制成2×106/ml悬液，加终浓度为100 mg/L的PHA置37℃，5% CO2培养48 h、离心(2000 r/min)取上清液，置-20℃保存，用ELISA测IL-2、IL-3和IFNγ，试剂盒均为美国Biomedical公司产品。 
　　2. T细胞亚群测定　采用APAAP桥联酶免疫检测法，试剂盒购自华美公司。

结　　果

　　一、　细胞因子及T细胞亚群结果　从表1可见再障患者CD8、IL-2值和IFNγ值高于正常对照组，而IL-3、CD3、CD4、CD4/CD8低于正常对照组，均有显著性差异。 
　　二、　再障患者细胞因子及T细胞亚群与病情关系　从表2可见治疗恢复期者CD8、IL-2、IFNγ低于尚未见效者，而IL-3、CD3、CD4、CD4/CD8高于尚未见效者，均有显著性差异。

表1　正常对照组与再障组  细胞因子及T细胞亚群比较(±s)细胞因子及T细胞亚群 正常对照组 
(n=20) 再障组 
(n=50) P值 
IL-2(ng/L) 50.66±20.42 109.82±48.47 ＜0.01 
IL-3(ng/L) 26.22±7.32 　11.92±6.84 ＜0.05 
IFNγ(μg/L) 　5.02±0.82 　10.19±5.42 ＜0.05 
CD3(%) 68.28±5.07 　55.61±11.48 ＜0.05 
CD4(%) 43.77±6.12 　35.29±9.60 ＜0.05 
CD8(%) 24.65±5.32 　28.22±3.49 ＜0.05 
CD4/CD8 　1.81±0.25 　1.38±0.20 ＜0.01

表2　恢复期与尚未见效组 三种细胞因子及T细胞亚群比较(±s) 细胞因子及T细胞亚群 治疗恢复组 
(n=20) 尚未见效组 
(n=30) P值 
IL-2(ng/L) 72.66±24.10 99.19±58.42 ＜0.05 
IL-3(ng/L) 24.62±8.92 15.29±9.41 ＜0.05 
IFNγ(μg/L) 　6.79±1.60 　9.96±4.99 ＜0.05 
CD3(%) 59.95±5.96 55.90±5.13 ＜0.05 
CD4(%) 40.15±1.86 36.17±2.97 ＜0.05 
CD8(%) 24.75±3.15 28.12±3.89 ＜0.05 
CD4/CD8 　1.69±0.24 　1.40±0.18 ＜0.01

　　三、　再障患者CD8与各因子间相关性分析　50例再障患者相关分析，发现CD8与IL-3呈负相关，r值-0.40；与IFNγ呈正相关，r值0.42；与IL-2无相关，r值0.18。

讨　　论

　　再障患者表现为外周血T细胞亚群失调，其异常激活的CD8细胞能抑制造血，其作用与其直接损害造血干细胞及CD8介导的造血因子失调有关［1］。我们实验结果表明CD3、CD4、CD4/CD8降低，CD8升高，治疗恢复期CD3、CD4、CD4/CD8上升、CD8下降，支持再障患者T细胞亚群异常及激活的CD8细胞起关键作用的观点。 
　　本文还显示，再障患者组IL-2含量明显高于正常对照组、与文献报道基本一致［2］。治疗恢复期患者组的IL-2明显低于尚未见效的病人组，提示再障患者IL-2异常升高与再障细胞免疫功能紊乱有关，治疗恢复期者IL-2降低接近正常对照组是细胞免疫紊乱得到调节的结果，与国内外报道一致［3、4］。 
　　据实验推测，再障患者IL-3等造血细胞生长因子活性低下［5］。本文实验结果表明再障患者IL-3含量明显低于正常对照组；而再障恢复期患者明显高于尚未见效者。故支持上述推测，说明IL-3能促进骨髓造血功能的恢复。 
　　本文50例再障患者IFNγ明显高于正常对照组，而再障恢复期患者明显低于尚未见效的病人，从而支持了IFNγ在人体内对造血细胞的抑制作用［6］，说明IFNγ与再障发病的有关。 
　　分析再障患者受检指标间的相关性发现CD8与IL-3呈负相关，与IFNγ呈正相关，认为CD8异常激活而升高，产生IFNγ量增多，共同抑制造血，而IL-3降低，使多种造血组细胞的增殖和分化能力下降，导致造血功能衰竭。揭示细胞因子的变化与再障的细胞免疫异常及造血抑制相关联，并反映细胞因子网络失调在再障发病中起一定作用。 
　　以本文实验数据初步分析，再障患者造血功能的减退与IL-2、IFNγ、CD8升高和IL-3、CD3、CD4、CD4/CD8降低有关，经治疗有效后IL-2、IFNγ、CD8降低和IL-3、CD3、CD4、CD4/CD8升高，支持细胞免疫功能障碍及细胞因子分泌紊乱参与再障发病。因此检测T细胞亚群及IL-2、IL-3和IFNγ对骨髓造血和再障的病情、判断预后及疗效观察有重要的参考价值。

参　考　文　献

［1］　Mentzel U, voget H, Rossol R et al.Analysis of lymphocyte subsets in patient with AA before and during immuno suppressive therapy. Ann Haematol,1993;66(3)∶127 
［2］　连天顺，赵志平．再生障碍性贫血白细胞介素-2及其受体细胞的研究．中华血液学杂志，1990；11(5)∶235

［3］　陈克奇，邵宗鸿，周宇等．再生障碍性贫血患者血中IL-1a，IL-2和SIL-2R水平变化．中国实验临床免疫杂志，1999；11(5)∶260 
［4］　Nissenc,Mosery,Weisj,et al. The release of interleukin-2 and colony stimulating activity (CSA) in aplastic anemia patient opposite behaviour with improvement of bone marrow function, Bult,1986;52∶221 
［5］　梁旭阳，李树浓，陈俊．免疫介导小鼠再生障碍性贫血与白细胞介素-3及其受体关系．中华血液学杂志，1993；14(4)∶174 
［6］　曹洛环，赵志平，白任查．再生障碍性贫血γ干扰素水平测定及其临床意义探讨．中华血液学杂志，1989；10(2)∶71

薛志忠（上海中医药大学附属岳阳中西医结合医院　200437） 
夏丰（上海中医药大学附属岳阳中西医结合医院　200437） 
何玮（上海中医药大学附属岳阳中西医结合医院　200437）