凋亡聚焦：invivo凋亡检测

　　目前市场上凋亡检测的产品真不少，但大多数是针对细胞。若想开展in vivo的凋亡检测，自然要花费一番功夫寻找产品。

　　Caspase检测

　　赛默飞世尔科技推出了DyLight 690和DyLight 747细胞凋亡体内检测试剂盒，为活体的凋亡检测提供了准确的方法。试剂盒包含DyLight 690或DyLight 747 In Vivo Polycaspase探针，这是一种细胞通透性的探针，可检测凋亡所产生的活性caspase。探针是DyLight 690或DyLight 747标记的VAD-FMK，波长不同，适合不同的仪器。

　　若想要标记凋亡细胞，只需静脉注射此探针，让其在体内循环。当探针遇上激活的caspase时，反应性的半胱氨酸与caspase异源二聚体的大亚基之间形成不可逆的共价键。结合的探针保留在细胞内，直至细胞膜损伤，逐渐损失较大的蛋白。未结合的探针就会被动物的循环系统快速清除，但会在肝脏中保留 3-4小时，并积累在膀胱和粪便中，直至排出。动物体内剩下的信号就是对caspase活性的直接测定。有了直接的in vivo标记，探针才能真正代表实验条件所引起的凋亡，而不是组织的体外操作所引起的凋亡。

　　探针的活体使用对药物测定研究很有价值，因为通过活体动物的荧光成像可测定药物反应性所引起的凋亡水平升高或降低。凋亡水平的升高使得粘附的探针更多，因此荧光强度增加。此外，活体技术避免了从动物上取出细胞和组织的需要，这会进一步诱导凋亡。

　　DyLight 690和DyLight 747细胞凋亡体内检测试剂盒中的探针大约能够注射10只小鼠，价格为4430元。赛默飞世尔也提供DyLight 690和DyLight 747体内对照试剂，价格为2780元，也可以使用10次。

　　膜检测

　　Sigma-Aldrich公司也推出了一款Apo-TRACE体内凋亡检测试剂盒，不过是检测凋亡中的膜变化。此款产品能实现凋亡细胞的体内染色和Apo-TRACE累积的定量分析。

　　Apo-TRACE是一种无毒的有机小分子，属于ApoSense™低分子量化合物家族中的一员。ApoSense化合物对膜电位改变和磷脂紊乱作出反应，这些也是早期凋亡的特征。一旦注入体内，化合物即可标记凋亡细胞。Apo-TRACE化合物具有固有的荧光特性(328 nm激发，563 nm发射)，并在活体内凋亡细胞的膜上积累。通过测定器官或组织中细胞上积累的荧光染料，即可定量评估凋亡细胞。由于大部分抗癌疗法都通过诱导凋亡而起作用，故Apo-TRACE的染色可指示疗法是否有效。

　　此款试剂盒足够注射25只小鼠，每只小鼠体重在20-27 g，价格为5435.82元。