分光光度中采用标准曲线法测定过程是什么

仪器与试剂

1．仪器紫外-可见分光光度计；量瓶、移液管、吸量管。

2．试剂亚硝酸钠，硝酸铝，氢氧化钠，乙醇(均为分析纯)，5％亚硝酸钠溶液，10％硝酸铝溶液，1mol／L氢氧化钠溶液，30％乙醇溶液，芦丁对照品，芦丁(原料药)。

实验内容与步骤

1．对照品溶液的制备精密称取在120℃减压干燥至恒重的芦丁对照品100mg，置100mL量瓶中，加甲醇70mL，置水浴上微热使溶解，放冷，加甲醇至刻度，摇匀。精密吸取10mL，置100mL量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得(每1mL中含无水芦丁0．1mg)。

2．标准曲线的制备精密量取对照品溶液(o．1mg／ml)o．0mL、1．0mL、2．0mL、3．0mL、4．0mL、5．0mL，分别置于10mL量瓶中，各加30％乙醇使成5．0mL，各精密加入5％亚硝酸钠溶液0．3mL，充分摇匀，放置6分钟。各精密加入10％硝酸铝溶液0．3mL，充分摇匀，放置6分钟。各加1lmol／L氢氧化钠溶液4．0mL，用蒸馏水稀释至刻度，充分摇匀，放置15分钟，用分光光度计，在510nm波长处测定吸光度。以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。

3．试样测定精密量取芦丁试样溶液(0．1mg／ml)3.0mL，置10mL量瓶中，按标准曲线制备项下自“各加30％乙醇使成5．0ml。“起依法操作直至测定出样品的吸光度。

数据处理

1．根据测得的对照品的数据，绘制A—C标准曲线或计算回归方程。

2．根据测得的试样的数据，从标准曲线上读出或由回归方程计算出试样溶液中芦丁的重量(rag)，按下式计算：