分光光度法对物质进行含量测定的操作步骤

一，在测量方法上　
如果是标准曲线的基体和样品的基体大致相同的情况，用标准曲线法：
首先配制一系列浓度的所测物质的标准溶液，用分光光度计测的吸光度A值，作出标准曲线（最好估测所测物质的浓度，使标准曲线包含这个浓度），再测出样品的A值，由标准曲线求出其浓度。
如果被测溶液成分复杂未知，就用标准加入法：
　　在数份样品溶液中加入不等量的标准溶液;然后按照绘制标准曲线的步骤测定吸光度绘制吸光度-加入浓度曲线用外推法求得样品溶液的浓度。首先要大概知道样品中待测物的含量；然后确定加入的C标准的量要和Cx相当；再就是线性方程一定要过坐标原点，即空白含量的吸光度值要为零，否则，你的线性方程为A=KC+B，此时还应该要作A=K(Cx+2C标准)、A=K(Cx+3C标准)，然后才能得出Cx。（选用这种方法需保证样品溶液足够量）
二，在紫外可见分光光度计使用上
首先确定要使用的分光光度计型号，我使用的为为双光束的T6型紫外可见分光光度计，使用时注意，开机初始化时不能打开仪器盖子，比色皿不能放在槽内，可以先对所测样品的任意一浓度在仪器波长范围内扫描，找出最大吸收波长，然后再最大波长下进行定量测定，每个溶液测定时先用该溶液润洗比色皿2-3次，倒入比色皿中液体约2/3，然后用擦镜纸擦干比色皿外壁，标准曲线法测量时，需用除含待测成分外的与样品一致的溶液校零（最重要的是在使用仪器前要了解具体仪器使用方法，可阅读说明书，操作和注意事项都有介绍）