分子排阻高效液相层析实验

蛋白质

SE缓冲液

层析柱

1.  用已脱气HPLC级水洗去SE柱的贮存溶剂，流速1 ml/min。在室温以已脱气的SE缓冲液在1 ml/min 流速平衡SE柱30 min 或直至基线稳定。

2.  注射100 μl  缓冲液进行一次空白样品的假层析，检测器设定在210~220 nm，0.1~1.0 AUFS。适宜的设定一般是：100 pmol 时为0.1AUFS，500 pmol 时0.3，1 nmol 时0.5，2 nmol 时1.0 ；作图速度为0.5 cm/min。

3.  在2 000 g 离心蛋白标准或蛋白混合物5 min 注射100 μl 上清，并重复步骤2操作。收集每个层析峰于不同的聚丙烯管子，并确定峰的洗脱体积。

4.  各分部组分脱盐，并用Speedvac蒸发器除去溶剂。

5.  最后一个洗脱峰的保留时间不应超过第1个峰的2倍，如果不是这样的话，流动相加20%甲醇以抑制蛋白与介质的结合。