分析磷酸化蛋白的新方法

　　蛋白磷酸化是重要的翻译后修饰，在调控基因表达和细胞功能方面起着关键作用。检测磷酸化时一般使用磷酸化抗体。近几年，市场上也出现了一些新的技术和产品，可实现磷酸化的灵敏检测。

　　Phos-tag™便是其中的一种。它最初由日本广岛大学医药分子功能科学研究室开发，后由Wako公司商业化。Phos-tag™是一种能与磷酸离子特异性结合的功能性分子。在中性pH(生理性pH)条件下，它可与阴离子取代基结合，特别是与二价的磷酸单酯阴离子结合。

　　Phos-tag™的基本结构

　　Phos-tag™技术便利用了这一特点，取代传统的酶免疫法和放射性同位素法，用来捕捉带有阴性取代基，特别是二价磷酸单酯阴离子的物质，改善了以往磷酸化检测结果不是特别稳定的缺点，是迄今为止检测磷酸化合物比较稳定的技术。

　　目前，Phos-tag™产品主要分为四大类，可用于磷酸化蛋白的分离(Phos-tag™ Acrylamide)、Western Blot检测(Phos-tag™ Biotin)、蛋白纯化(Phos-tag™ Agarose)及质谱分析MALDI-TOF/MS(Phos-tag™ Mass Analytical Kit)。

　　磷酸化蛋白的检测

　　Phos-tag™ Biotin是与生物素结合的Phos-tag™，可代替western blot检测中的磷酸化抗体。Phos-tag™ Biotin BTL-104和BTL-105可灵敏检测PVDF膜上的磷酸化蛋白。现推出液体型。

　　特点：

　　• 无辐射

　　• 无需PVDF膜的封闭处理

　　• Phos-tag™的特异性结合与氨基酸种类、序列无关

　　• 可适用于免疫印迹和质谱分析等后续工作

　　• Phos-tag™-BTL母液可稳定保存至少6个月

　　• 实验流程与使用HRP标记抗体相类似

　　磷酸化蛋白的分离

　　Phos-tag™ Agarose为分离、浓缩天然磷酸化的蛋白和生物样品(生理条件下)中磷酸化多肽提供一种高效的方法。

　　特点：

　　• 缓冲液不含有还原剂和去污剂

　　• 与亲和层析方法类似

　　• 可在1小时内纯化磷酸化蛋白

　　• Phos-tag™ Agarose捕获结合到Tyr、Thr、Ser、Asp、His等氨基酸、糖类、脂类上的无机磷酸根和大量二价磷酸根