利用筛网的机械分离法

生长培养基 镊子 筛网 皮氏培养皿 手术刀 一次性塑料注射器 培养瓶

1. 清洗后切割组织（见方案 12. 5 的步骤 1 和步骤 2），将组织切碎为 3~5 mm³ 大小，每次取几块组织块放在孔径 1 mm 的不锈钢或聚丙烯筛网（筛网或孔径 100 μm~20 μm 的一系列筛网，或 Falcon 的细胞滤器）上，网置于 9 cm 皮氏培养皿中或离心管中。





2. 用注射器（一次性塑料注射器，2 ml 或 5 ml）的芯轻轻加压使组织通过网孔进入培养基，吸取培养基（生长培养基，如：DMEM/F12，含10 % 胎牛血清）吹过筛网将细胞冲下。

3. 吸取分离的组织加入 100 μm 孔径的筛网，重复步骤 2。

4. 此时获得的细胞悬液可稀释接种，若为了得到单细胞悬液也可进一步通过 20 μm 的筛网。通常对细胞悬液分离程度越高剪切力越大，存活率越低。

5. 用培养基将细胞悬液稀释至 2×10⁵ /ml、1×10⁶ /ml 或 2×10⁶ /ml，接种于培养瓶。