1，接种环需以无菌操作，载玻片要洁净无油迹，滴生理盐水和取菌不宜过多，涂片要涂抹均匀，不宜过厚；2，干燥是室温干燥；3，热固定温度不宜过高，以玻片背面不烫手为宜，否则会改变甚至破坏细胞形态；4，染色时滴加染液覆盖上菌体薄膜即可；5，染色过程中，不可使染液干涸。
