制备肌动蛋白实验

肌球蛋白

肌球蛋白抽提溶液

离心机

1. 抽提肌球蛋白时得到的沉淀物用 3 倍于沉淀物体积的肌球蛋白抽提溶液抽提 10 分钟。

肌球蛋白抽提溶液：

0.5 mol/L KCl

0.1 mol/L K₂HPO₄

2. 抽提物离心（GSA 转头，13000 r/min，17310 g）15 分钟，去掉上清。

3. 在肌肉残渣中加 1 L 冷的 dH₂O，搅拌，然后用 1 mol/L Na₂CO₃ 调 pH 到 8.2~8.5。

把混和物分到 6 个 250 ml 的瓶中，离心（GSA 转头，13000 r/min，17310 g）15 分钟离下含肌动蛋白的不溶物。

4. 去掉上清。然后如步骤 3 所述再次离心。倒掉上清并用合适的记号笔画出沉淀物的轮廊（这可以在以后的步骤中确定什么时候沉淀物开始涨大）。加足量冰冷的 dH₂O 装满离心瓶以重悬沉淀物。大概重复 4 次直到沉淀物开始涨大。

5. 沉淀物一开始涨大，不管用水洗的次数是多少，都接着进行下个步骤。

6. 在 250 ml GSA 离心桶中用冰冷的丙酮重悬肌肉残渣，剧烈搅拌大约 20 分钟。

7. 离心（CSA 转头，13000 r/min，17310 g）沉淀 15 分钟并去掉上清。此外，沉淀可以在 Bounce 漏斗上过滤。

8. 重复步骤 6 和 7。

9. 把沉淀的蛋白铺在滤纸上（例如 Whatman 3MM ) 并让它在室温过夜干燥。

10. 第二天，如步骤 6 所述的那样，把干了的丙酮粉重悬在氯仿里并离心以去掉多余的脂肪。过滤并干燥沉淀。