动物实验技术2

2．于第①、②、③管内分别加乙型溶血性链球菌培养物、四联球菌培养物、生理盐水各0.5m1。

3．上述3支试管每管加入5%氯化钙0.2ml，摇匀，置37℃水浴10min，待血液凝固，再继续37℃水浴约30min，观察结果。

【结果】

l．观察时，可将小试管慢慢倾斜至30°，轻轻摇动。凡凝固血块又发生溶解，出现液体者，为链激酶试验阳性，否则为阴性。

2．本试验①管为阳性，②管为阴性，③管为阴性对照，无液体出现。

（四）荚膜的致病作用

【材料】

1．菌种：Ⅲ型肺炎链球菌。

2．小白鼠。

3．无菌lml注射器和针头。

4．荚膜染色液。

【方法】

1．取20g左右重的健康小白鼠1只，腹腔或皮下注射肺炎链球菌菌液0.5m1，饲养观察

2．待濒临死亡时，及时解剖，取血接种血平板，作细菌培养。

3．取其腹腔液涂片，作荚膜染色镜检。

【结果】

1．有毒力的肺炎链球菌，能使小白鼠在12～36h濒临死亡。

2．血培养可获肺炎链球菌纯培养物。

3．有毒力的肺炎链球菌，荚膜染色镜检，可见有明显的荚膜。

四、外毒素的致病作用

【材料】

1．小白鼠。

2．破伤风梭菌培养物(破伤风外毒素)。

3．无菌lml注射器和针头。

【方法】

将破伤风梭菌接种庖肉培养基，37℃培养48h，吸取上清液，3000r/min离心30min，弃去沉渣。临用时作1∶100稀释。

1．试验组：取小白鼠1只，于一侧后腿肌肉注射破伤风梭菌滤液0.2～1.0ml。

2．对照组：取1只小白鼠，于一侧肌肉注射破伤风抗毒素l00u，30min后，于另一侧肌肉注射0.2～1.0ml破伤风杆菌培养滤液。

【结果】

逐日观察，实验组小白鼠的后腿及尾巴强直性痉挛，继而延及全身，动物全身痉挛，2d内死亡。此为毒力试验阳性。对照组小白鼠仍健康存活。

五、内毒素的致病作用

【材料】

1．脑膜炎奈瑟菌内毒素。

2．小白鼠。

3．无菌1ml注射器和针头。

【方法】

1．取脑膜炎奈瑟菌18～24h培养菌液，60℃加热5～10min，杀死细菌，成为粗制的内毒素。

2．取20g左右重的健康小白鼠1只，将其固定，暴露尾巴，用酒精反复擦拭，使尾部血管充血。

3．取上述处理的菌液1ml，注入小白鼠尾静脉。

4．约5h后，用颈椎脱位法杀死小白鼠，解剖观察。

【结果】
可见皮下弥散性紫瘢，肝脏淤血水肿，肾脏及肾上腺充血，肠系膜及腹壁血管明显充血