动物细胞培养主要仪器

一、洁净间摆放的仪器

（一）提供细胞培养环境的仪器

l.CO2培养箱

指能精密控制并提供恒温、恒湿、洁净、恒定CO2浓度的仪器，利用该仪器可使用培养皿、多孔板（(6-96孔板）、培养方瓶等进行细胞培养。

根据容积大小，有60-190L台式，也有上下堆叠落地式。

根据通气状况，一般通CO2和空气，也有3气（CO2、N2和空气）或4气（CO2、NZ2、O2和空气）培养箱。

根据控温类型，区分为水套式和气套式两种。

2．细胞工厂

在CO2培养箱中，应用特定的培养容器进行细胞大量培养。

3．滚瓶培养

(1)滚瓶培养箱放置于CO2培养箱中使用，有驱动滚瓶滚动的机械装置，可以应用滚瓶进行细胞大量培养。

(2)滚瓶培养架在CO2浓度、温度、湿度可控的洁净间内使用，有驱动滚瓶滚动的机械装置，可以应用滚瓶进行细胞大量培养。

4．生物反应器

生物反应器，也称动物细胞罐，应具有良好的无菌控制，通过专门的控制器组件进行细胞大量培养，一般需要4气（CO2、N2、O2和空气）培养，可分批次培养和连续培养形式。

需要配置专门的补料瓶。培养工艺复杂，仪器设备的造价往往很高，通常用于研究、中试和生产。

根据罐体容量和培养容量（培养容量往往比罐体容量小）区别大小。一般在研究实验室使用的生物反应器的罐体体积常在30L以下，用于生物制品制备的生物反应器体积达到500L以上。罐体可以是钢化玻璃、陶瓷，也可以是不锈钢或钦合金或铁。

（二）用于换液操作的仪器

1．微量移液器

微量移液器是常用的无菌操作移液用仪器，有单通道、8通道和12通道等规格。常见的种类如下：

(1)50-200μl单道微量移液器，配套200μl无菌塑料吸嘴使用。

(2)50-300μl8道微量移液器，配套300μ1无菌塑料吸嘴使用。

(3)500-5000μ1微量移液器，配套5000μ1无菌塑料吸嘴使用。

(4)电动大量移液器，配合无菌长丝滴管、无菌刻度移液管使用，移液速度可调。

（三）镜检与显微影像记录仪器

1．倒置显微镜和倒置荧光显微镜

与正置显微镜（普通显微镜）的主要区别在于，倒置显微镜是载物台在光源下方，或者说物镜在载物台下方的显微镜，使得物镜镜头与培养物液层下方的距离最短。

倒置荧光显微镜是带有紫外光源（荧光激发光源）的倒置显微镜。

倒置显微镜和倒置荧光显微镜都分别比同品质的正置显微镜（普通显微镜）和正置荧光显微镜（普通荧光显微镜造价高出10倍以上。倒置显微镜和倒置荧光显微镜往往属于三目显微镜（指除了装配有2个普通目镜外，尚有接驳显微摄影的目镜）。

2．显微摄影系统

指通过接圈与显微镜三目接头相连，借助配套的专业PC软件获得显微影像并能进行处理的装置。

3．细胞计数器材

细胞计数常用的是血细胞计数板或细胞计数仪。

细胞计数仪价格昂贵，如invitrogen的Countess自动细胞计数仪。

一般地，血细胞计数板并不属于仪器，单价数十至数百元。但是，血细胞计数板有计量许可，计数窗有玻璃刻画线，与配套的盖玻片一起使用。有2个计数窗，每个计数窗使用有4-5个计数大格。细胞密度／ml＝计数窗内大格的平均细胞数×104/ml。

（四）无菌操作依赖的仪器

无菌操作的区域主要是在洁净间内的超净工作台内完成的。

1．空气净化器

使洁净间内空气按要求进行除尘、紫外消毒灭菌、循环。

2．洁净间换气装置

使洁净间外新鲜空气经过初效和高效滤器滤过除尘后进人室内，并且把室内含粉尘的不新鲜的空气按要求排放到室外的装置，一般设置有定时开关，使每小时换气达到一定的次数，保证洁净间内空气洁净度维持在某个级别以上。

3．超净工作台

超净工作台，也称超净工作台或无菌工作台。根据通过高效滤器送出风的方向区分为垂直风淋和水平风淋两种，风速可调，内置照明灯管和紫外灯管。垂直风淋超净工作台常见的有单人双面、双人双面、单人单面、双人单面等规格。

(1)超净工作台使用步骤

①用前准备：先用消毒抹布擦拭台面干净，整理台面器材到台面两侧，关闭两侧玻璃门，开启电源开关，打开风淋，单独打开紫外灯照射30-40min再关闭；

②使用时：操作者双手（或戴手套）消毒，打开照明灯，抬升玻璃门至合理高度，可点燃酒精灯以便辅助灭菌或消毒使用。由外部拿人的无菌操作物品需注意除尘处理（先在超净工作台外部拆解无菌物品的外包装、用消毒酒精棉球擦拭存尘外表面等）；

③使用后：及时清理废弃物和溅落物，移走用过的器材，摆放好台面物品，并用消毒抹布或消毒酒精棉球擦拭台面使干净，关闭照明灯和侧玻璃门，打开紫外灯照射30-40min再关闭，然后关闭风淋和总电源开关。

(2)超净工作台使用注意事项

如果超净工作台电源、照明灯、紫外灯、风淋等出现异常，需经过调节使正常后方可使用。

操作者双手在洁净台内部分的穿着（穿戴洁净服、乳胶手套，或无穿戴）必须符合无菌操作要求。

每次使用后用消毒液浸泡的湿抹布擦抹台面粉尘，长时间不使用超净工作台也应定期用消毒液浸泡的湿抹布擦抹台面粉尘。

定期擦抹照明灯管和紫外灯管上可能存在的微尘，以便保证充足的照明效果和充分的消毒灭菌效果。

二、试剂、培养用液及细胞材料处置用仪器

所涉及的一般试剂通常存放于辅助间柜子或洁净间柜子。需要冷藏或冻存的生化试剂、血清、培养基、细胞材料等，需要区别对待，存放到对应的仪器内，以保证其活性和功能。

（一）用于生化试剂、培养用液存放的仪器

1．普通冰箱

存放培养用液的普通冰箱，通常放于洁净间。

普通冰箱一般分为冷藏区和冷冻区，冷藏区的温度一般调节到4℃左右，冷冻区的温度一般最低能调节到-26℃。不能冻存的试剂和材料必须放冷藏区，可以冻存的试剂和材料最好放在冷冻区。

2．冰拒

冰柜分冷藏冰柜和冷冻冰柜。可大量存放生物试剂和材料。

3．低温冰箱

只有冷冻区，一般指低温能控制到-50℃，高温不超过0℃的冷冻用冰箱。用于长期存放蛋白类材料或试剂。

（二）细胞材料冻存用仪器

1．超低温冰箱

一般指低温能达到-50℃以下，如-70℃，或者-86℃的冷冻用冰箱。主要用于细胞株、细胞系或其他细胞材料如组织、胚胎等的短期保存。

2．液氮罐

液氮层内的温度为-196℃，有足够液氮的液氮罐内气体部分的温度可到-100℃以下。通常用于保存细胞株、细胞系或其他细胞材料如组织、胚胎等。

液氮会自动升华，因此，根据实际消耗状况，需及时地定期、定量地补充液氮。一般认为液氮内的细胞株、细胞系或其他细胞材料如组织、胚胎等可以实现永久保存。

（三）培养用液升温用仪器

一般需要准备一台恒温水浴，用于培养用液从零上低温到37℃的升温。恒温水浴使用时需加注纯水以免产生水垢影响无菌操作。