取动物胚胎或幼龄动物器官、组织。将材料剪碎,并用胰蛋白酶(或用胶原蛋白酶)处理(消化),形成分散的单个细胞,将处理后的细胞移入培养基中配成一定浓度的细胞悬浮液。悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上,当贴壁细胞分裂生长到互相接触时,细胞就会停止分裂增殖,出现接触抑制。
此时需要将出现接触抑制的细胞重新使用胰蛋白酶处理。再配成一定浓度的细胞悬浮液。另外,原代培养就是从机体取出后立即进行的细胞、组织培养。
当细胞从动植物中生长迁移出来,形成生长晕并增大以后,科学家接着进行传代培养,即将原代培养细胞分成若干份,接种到若干份培养基中,使其继续生长、增殖。通过一定的选择或纯化方法,从原代培养物或细胞系中获得的具有特殊性质。
培养条件:
1、无菌、无毒的环境:对培养液和所有培养用具进行无菌处理,通常还要在培养液中加入一定量的的抗生素,以防被污染。此外应定期更换培养液,以便清除代谢产物防止细胞代谢产物累积对细胞自身产生危害。
2、营养物质:无机物(无机盐、微量元素等),有机物(糖、氨基酸、促生长因子等)。
3、血清和血浆 。(提供细胞生长必须的营养成份)
4、温度和pH。(36.5±0.5℃,7.2~7.4)
5、气体环境。(95%的空气+5%CO₂的混合气体)
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