胆红素在天然牛黄中的含量达50-60%,是人造牛黄的贵重原料。目前,国内外胆红素的含量测定均采用胆红素与EH-RLlch氏重氮试剂反应,所产生的颜色可以用色差计进行比色,测定其含量。但是对于其内部含有氮原子的原因,尝试应用半自动定氮仪对胆红素的含量进行测定,通过以下分析可知以上方法的可行性:
消化:精密称取0.2g左右样品,加入3g消化剂,置半自动定氮仪的瓶中,电炉加热进行消化,待显绿色后再消化一小时,放冷。然后再稀释到100ml容量瓶中,再精密量取5ml(约相当lmg的N)经由加碱漏斗倾入定氮蒸馏瓶中,进行蒸馏。另外最后的滴定:吸收液用N/100盐酸液滴定至由深绿色变为兰灰色,并将滴定结果用空白试验校正。
取硼酸吸收液5ml置100ml锥形瓶中,将冷凝器尖端浸入吸收液中,用以吸收蒸馏出的氨,由加碱漏斗力口入40%氢氧化钠溶液5ml,用少量蒸馏水冲洗漏斗,然后用皮管夹闭塞加碱口)将蒸气口皮管夹打开,半自动定氮仪进行蒸馏,至吸收液开始变色时起计时,10分钟后,将冷凝器尖端提出液面,用蒸馏水冲洗尖端,洗液与吸收液合并。
元素分析结果与半自动定氮仪法分析的结果89.62%极为接近,因而证明使用半微量定氮法测定胆红素这一方法是可行的。目前各单位使用比色计法测定胆红素含量,结果往往不稳定,一般结果偏高,不易掌握,这主要受显色时的温度、时间、所使用的各类不同的仪器精密度等影响。相比较而言,半自动定氮仪法测定胆红素含量,由于不需使用标准品,同时由于准确性高,操作方便,因而在实际应用中,容易推广使用。
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