原生质等电点测定实验

柠檬酸溶液Na2HPO4 溶液苯胺红溶液亚甲兰溶液

移液管刀片小培养皿小烧杯毛笔镊子粗滤纸

一、材料与设备

四季豆黄化幼苗，蚕豆幼苗

5 ml 及1 ml 移液管、刀片、小培养皿、小烧杯、毛笔、镊子、粗滤纸

0.1 M柠檬酸溶液、0.2 M Na2HPO4 溶液、0.1％ 苯胺红溶液、0.1％ 亚甲兰溶液

实验步骤

1．依下表配制不同pH的缓冲液，用不同pH的缓冲液按以下比例配制5 ml 混合染料，4 ml 缓冲液+0.5 ml 0.1％苯胺红+0.5 ml 0.1％亚甲兰溶液，分别盛在小培养皿中。

2．取四季豆幼苗胚茎小段，作徒手切片 36 片用70％酒精固定 5 分钟，然后分别取出6片放入各个缓冲液的混合染料中染色20－30 分钟。倾去染料，立即加入相应pH的缓冲液5ml，浸泡（以浸没组织为限），一小时后，观察各个缓冲液中的制片颜色的变化。取在等电区附近的制片，在光镜下观察，精确地比较植物组织的等电点。

本实验中的酸性染料亦可采用曙红，若用曙红进行染色时，不必配制不同pH值的缓冲液的混合染料，可直接取染色液（浓度有0.01 M ）等量混合，进行染色20－30分钟，然后将切片取出分别浸入相应pH的缓冲液内浸泡，半小时后，便可以取出切片鉴别组织的等电区。