双向免疫扩散法测定抗血清效价实验—双向免疫扩散法

将抗原和相应抗体分别加入同一凝胶板中的相邻小孔中，使两者互相扩散，当扩散到它们的浓度达当量点时(浓度相当)形成沉淀线。如果抗原-抗体的浓度合适时，沉淀线在两孔的中间。如抗体过量，沉淀线靠近抗原孔。如抗原过量，沉淀线靠近抗体孔。
此技术可以测定抗血清的效价。

人IgG 兔抗人IgG

生理盐水 琼脂 硫柳汞 叠氮化钠

载玻片 水平仪 打孔器 有盖的搪瓷盘 酒精灯 牙签 微量加样器 恒温培养箱

1. 将盛有3 ml生理盐水琼脂的小试管置水浴中熔化。

2. 将熔化好的琼脂小心倒入已调好水平的载玻片上，每块厚度为1 mm。

3. 琼脂凝固后，按模板打孔，孔内的琼脂如未被吸出则可用牙签挑出，中心孔为加抗原的孔，四周的6个孔为加抗体的孔，孔径3 mm，孔距4 mm。打孔后将玻片于酒精灯上烤背面(温度不宜过高，以不烫手为宜)，使琼脂与玻片粘紧。

4. 将兔抗人IgG按二倍稀释法稀释成1∶2，1∶4，1∶8，1∶16，1∶32的不同浓度。

5.从上到右到下到左的顺时针方向将不同稀释度的抗体定量加入周围五孔，第六孔加生理盐水作为对照(千万不要溢出或漏在琼脂胶上)。

6.小心将板放入湿盒内，置37 ℃温箱，经24 h扩散，第二天观察。

7.观察沉淀带的出现情况并画下来，在有沉淀出现的稀释抗原中，稀释倍数最大的一孔的抗原稀释倍数即为抗体效价。

1. 玻璃板必须仔细洗干净，制胶板时放置水平，使制得琼脂板厚度均匀。一般凝胶厚度1～2mm为宜。

2. 琼脂应在沸水浴中充分融化。一次配制较多琼脂液时应分装成20～50mL小体积。以避免多次再融化改变浓度。

3. 琼脂(糖)的浓度可视气温略加调整：夏天浓度可加大至1.2％～1.5％，冬天则可以用0.8％~0.2％。