双向电泳和质谱技术分析HCVNS3转化肝细胞的蛋白质组

[摘要] 　目的: 持续感染丙型肝炎病毒( HCV ) 在肝细胞癌( HCC ) 发生中起重要作用, 细胞转染和成瘤实验表明HCV NS3 对人肝细胞具有转化作用和致瘤活性。本实验旨在探讨HCV 非结构蛋白3(NS3 ) 转化肝细胞的蛋白质组。方法: 构建稳定表达HCV NS3 N 端多肽的人肝细胞( pRcHCNS3 /QSG)及空白质粒转染细胞( pRcCMV /QSG) ,双向电泳技术分离两种细胞的总蛋白,差异蛋白质点进行质谱分析,Western印迹验证蛋白表达差异。结果: 得到分辨率较高、重复性较好的双向电泳图谱。pRcHCNS3 /QSG和pRcCMV /QSG细胞的蛋白质斑点数分别为( 1 18 3 ±77 ) 和( 1 0 95 ±82 ) 个, 两组平均匹配数为( 92 0 ±6 0 ) 个。初步鉴定出15 个有意义的蛋白质点。其中Ras, P38 , HD53 等参与调节信号转导的蛋白在pRcHCNS3 /QSG细胞中表达上调,Western印迹结果亦证实pRcHCNS3 /QSG细胞中磷酸化的P4 4 / 4 2和P3 8 表达增加。鉴定出的差异蛋白质还包括一些调节细胞周期、免疫反应、与肿瘤侵袭和转移相关的蛋白质及参与肝脏代谢的蛋白质。结论: HCV NS3 可能通过影响多种蛋白表达, 经相应信号转导途径,如丝裂原活化蛋白激酶途径,使细胞发生恶性转化。进一步弄清信号转导过程和相互关系不仅对了解HCV 相关性HCC的发生机制有重要意义,而且为从分子水平治疗HCC提供新思路。