双酶切，两个酶温度不同怎么办

如果能够找到让两种酶同时作用的最佳缓冲液NEBuffer，那就可以同时双酶切。如果找不到就只能采用分步酶切。分步酶切应从反应要求盐浓度低的酶开始，酶切完毕后再调整盐浓度直至满足第二种酶的要求，然后加入第二种酶完成双酶切反应。