反向PCR可用于研究与已知DNA区段相连接的未知染色体序列,因此又可称为染色体缓移或染色体步移。这时选择的引物虽然与核心DNA区两末端序列互补,但两引物3’端是相互反向的。扩增前先用限制性内切酶酶切样品DNA,然后用DNA连接酶连接成一个环状DNA分子,通过反向PCR扩增引物的上游片段和下游片段;现已制备了酵母人工染色体(YAC)大的线状DNA片段的杂交探针,这对于转座子插入序列的确定和基因库染色体上DNA片段序列的识别十分重要。 反向PCR原理图
反向PCR(inversePCR)反向PCR是一种多聚合酶链式反应(PCR)应用的方法,可使已知序列的核心区边侧的未知RMA成几何级数扩增。用适当的限制性内切裂解含核心区的RMA,以产生适合于PCR扩......