反转录病毒原液检测实验——在TrisTricine缓冲系统中电泳

蛋白质

Tricine样品缓冲液考马斯亮蓝染色液乙酸

电泳仪离心机

1.  按“Laemmli凝胶电泳法”的步骤1~7，配制溶液并灌制分离胶和积层胶。

2.  制备样品，但采用2×Tricine的样品缓冲液，加样前样品于40℃处理30〜60 -11。多肽分子量标准混合物用作多肽分离的对照。

3.  组装电源装置并加样。但加样孔是以Tricine阴极缓冲液或水加以冲洗并以之充满；在电泳装置的下缓冲液槽加入阳极缓冲液，上缓冲液槽加入阴极缓冲液。

4.  连接电源，在30 V 恒压下电泳1 h 后，接着在150 V 恒压下电泳4 h。使用热交换装置使电泳缓冲液槽温度维持室温水平。

5.  当考马斯亮蓝G-250示踪染料到达凝胶的底部时，将电压调回零并断开电源。

6.  取出凝胶，在考马斯亮蓝G-250染色液中染色2 h，接着在10%乙酸水溶液中脱色，每隔30 min 换液1次，直至背景干净为止，需要更高检测敏感度时，推荐采用银染的方法。