叶绿体（chloroplast）分离

设备：Hitachi CF—7D2离心机，T5SS或T4SS或T7A转头50ml PP 离心管CP—MX ，CP—WX超速离心机，R28S转头，40ml PA管。（或其他品牌离心机，同类转头）

溶液配置：

A液：0.35M Sorbitol，（山梨醇），50mM Tris—HCL (PH8.0) 5mM EDTA-Na₂

(使用前加入2-mercaptoethanol 及 BSA 终浓度0.1％（v/v）)

B液：0.35M Sorbitol，50mM Tris—Hcl (PH8.0) 25mM EDTA—Na2

C液：30％（w/w）蔗糖，50mM Tris-Hcl(PH8.0) 25mM EDTA—Na2

D液：52％（w/w）蔗糖，50mM Tris-Hcl (PH8.0) 25mM EDTA—Na2

分离步骤：

1．菠菜液40g+A液200ml，制成匀浆，过滤

2．CF7D2或同类离心机2500RPM×15分，4℃，50mlPP管，得到约10克沉淀。

3．沉淀用6.5ml B液稀释后得到9.5-10ml原液

(这是超离单管容量，如果用较多离心管分离，可按比例增加原液)

4． 日立超离R28S转头（6×40ml），40mlPA管中底部加18ml D液，中层7ml C液，上部加9.5-10ml 原液。（加到距管口3mm）

离心：25，000rpm，60分，4℃，加速“7”减速“8”

5．离心后，叶绿体分布在离心管中部形成叶绿体深色条带（宽13-15mm）

6．检视：可用光学显微镜（×450）可观察到绿叶体颗粒。