吉姆萨染色实验

原位杂交玻片

吉姆萨染色液 磷酸钠缓冲液 乙醇 二甲苯

染色盘 培养箱 滤纸

1.  将显影的玻片置于玻片架上，浸入盛有水的染色盘中。

（1）1个盘：pH6.8 10 mmol/l 磷酸钠缓冲液，所配的25倍稀释的吉姆萨染液。

（2）3个盘：水。

（3）脱水系列溶液：

①3个盘：分别盛50%、70%和95%乙醇。

②2个盘：盛有100%乙醇。

③3个盘：盛有二甲苯。

3.  在25倍稀释的吉姆萨染液中染玻片20 s（依染色时间决定染色的强弱），将玻片在水中浸泡3次，每次2 min。

4.  连续用乙醇脱水系列溶液处理，每盘中浸泡2 min，将玻片移至二甲苯盘中，毎次浸泡2 min，共3次。

5.  在通风橱中，按如下操作压片固定：用一平头镊（拿在左手），从二甲苯中取出一块玻片，夹住磨面端置水平。加4滴Permount 的于另一端（切片所处位置），左手拿一干净的盖玻片，很缓慢地放在载玻片上（在加压片固定介质和盖玻片前，勿使玻片变干，因微小气泡会造成人为假象）。

6.  用3MM 滤纸，沿盖玻片边缘，小心吸去多余固片介质/二甲苯，并擦拭载玻片背面（勿擦拭盖玻片）。

7.  将玻片平放于一硬纸盒盘上，置42℃温孵箱2天使之凝固。

8.  以剃须刀片小心刮去载玻片背面残留胶乳，染料及固片介质。用镜头纸或普通棉纸擦去尘埃。放入玻片盒，必要时，载玻片上再注明标签。

9.  显微镜观察玻片，观察时可依信号强弱，调节光亮。

1.  勿将玻片直立存放于玻片中，因此时固片介质尚未凝结。

2. 细胞染色对氢离子浓度十分敏感，染色用正经片一定清洁，要无酸碱污染。

3. 配制顼特液一定用优质甲醇，稀释染色一定用缓冲液，冲洗一定用水应近中性，不然可导致各种细胞染色反应异常，以致于识别困难，甚至造成错误的。

染色实验与染色浓度，细胞的多少，室温有关，染液淡，温度低，细胞多则染色时间较长，反之，可减少时间，必要时可增加染液量或增加时间。冲洗前，需要在低倍显微镜下观察染色是否核质分明，是否染色清楚。