同位素标记自动检测药物代谢物优于RAM方法

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Mass Works 技 术 专 题

利用特异的同位素标记轮廓自动产生质谱峰的提取离子色谱图

概览：

• 根据14C标记的同位素谱图自动检测药物代谢物
• 新运算法则校正质谱的质量数和峰形，且自动计算12C/14C比率
• 三个研究实例显示，这种方式相对于在线放射性监测（RAM）具有更好的选择性和灵敏度。

      在药物代谢研究中，利用放射性同位素或稳定同位素标记药物分子，是研究复杂生物基质中母药及其主要代谢物的有效方式。同位素标记药物和代谢物常常与它们非标记配位物共存，产生唯一的同位素轮廓图。这个唯一的同位素轮廓图能够利用LC/MS 进行代谢物识别，而在LC/MS 生物样品分析中，找到这些代谢物峰需要很大的工作量。这里报道一个基于峰形校正的新方法，可以自动过滤筛选出具有唯一同位素轮廓的代谢物。

实验：

      14C标记和非标记的测试样，12C/14C比例为50:50、65:35和75:25，浓度分别为1和10 uM在人肝细胞和肝脏微粒体中进行培养。培养后，培养混合物利用1或3倍体积的冰冷甲醇提取，甲醇提取物用于放射物检测和LC/MS分析，全部LC/MS数据利用ABI/Sciex API 4000 Qtrap进行采集并利用MassWorks软件分析。

结果与讨论：

    作为含有12C和14C分子的混合物，14C标记的药物及其代谢物具有唯一的同位素轮廓。利用新型校正技术，这些轮廓图能用于自动快速检测代谢物。

     一个研究实例表明：对比在线放射性监测（RAM），12C/14C同位素轮廓直接提取离子色谱图（IPDXIC）明显比RAM具有更高的选择性和灵敏度，IPDXIC不仅找到RAM中的全部峰，而且也检测到RAM中没有发现的峰。

      IPDXIC的高选择性、高灵敏度检测进一步表现在低浓度样品情况下，在实例中，RAM仅仅检测出一个峰，而相应的IPDXIC检测出9个代谢物。

      另一个重要特点是，这种方式完全自动操作，不论12C/14C比例多少，一个校正，即可得到不同比例（50:50、65:35和75:25）的有效IPDXIC结果。


结论：

• IPDXIC数据处理完全自动、容易操作
• IPDXIC相对于在线RAM，检测14C标记的代谢物具有更高的灵敏度
• 利用唯一的校正运算法则，不需要指定12C/14C比例就可以发现同位素轮廓图
• 该方法对于其它放射性同位素标记的代谢物、稳定同位素或含有Br和Cl的代谢识别也是有效的。