同时测定三聚氰胺和三聚氰酸（二）

通过几个色谱因子的综合考虑可以为方法优化提供更大的适应性，并能控制三聚氰酸的保留时间，大概在6~15min的范围。

图3.  流动相的总离子强度对保留时间的影响。

质谱检测优化

质谱检测的优化和色谱的优化相结合。图4是最优化分离度、灵敏度和高通量方法的校准标准色谱图。

图4.  最优化条件下的校准标准色谱图。

宠物食品的方法验证

线性和校正曲线

美国FDA的校正标准中，使用稳定的元素标记物（三聚氰胺－15N3和三聚氰酸－13C3）作为内标物（ITSD）。这些标准物用来做标准曲线，计算线性。从2ng/ml到200ng/ml的范围内的线性非常好，可见图5，图6。

图5.  三聚氰胺的校准曲线。

图6.  三聚氰酸的校准曲线。

方法检测限（MDL）

方法检测限通过对校正标准物7次重复进样，以及下面方程式来计算：

MDL=tgg%×S｛n=7｝

t在99%的置信区间（tgg%，n=7 = 3.143），S为标准偏差。三聚氰胺和三聚氰酸的MDL分别为3.97 ng/ml和3.92 ng/ml。

生物样品的方法验证

色谱图

从美国FDA获得的猪和鱼组织提取物（控制和加标样）用FDA的标准来处理，所有的生物样品挥发干后用流动相重溶。图7是控制样品（空白猪肉样品的提取物，提取前ISTD，三聚氰胺或三聚氰酸加标）的SIM色谱图。

图7.  对FDA控制样品挥发并用流动相重溶后测定的色谱图。

重现性

由于多次进样会对色谱造成影响，未知化合物的积累造成干扰，这些干扰物需要额外计算，例如梯度运行或柱子清洗，因此验证方法的重现性是非常重要的。在这个研究中，通过重复进样三聚氰胺和三聚氰酸加标样品来验证方法重现性，结果见表2。对三聚氰胺的保留时间和量的重现性都非常好。三聚氰酸保留时间的重现性有一点变换，可能是样品处理中残留的甲酸的影响。

表2.  方法重现性

结论

本文介绍了一种简单、快速的LC-MS方法，可同时检测三聚氰胺和三聚氰酸，三聚氰胺和三聚氰酸的保留时间和整个分析周期都令人满意，方法重现性也得到验证；质谱检测器的检出限<5 ng/ml；线性极佳，在2~200 ng/ml的范围内R2>0.9995。目前该方法已用于分析美国FDA处理的生物样品。