养细胞时,除了支原体的检测需要定期进行外,支原体的预防和祛除也是一个重要方面。
它包括工作区域中的支原体的预防和祛除和培养箱水槽、水浴锅中预防支原体的污染。但一旦发生细胞培养时有支原体污染,应如何挑选支原体祛除剂呢?
这里指的支原体祛除剂,是加入到细胞培养基中来发挥作用。
德国MB有三种支原体祛除剂,都是加入到细胞培养基中使用。它包括:
1. 支原体祛除剂Zell Shield®
它是复合抗生素成分,抑制支原体蛋白和DNA合成,也抑制细菌和真菌。
适合细胞已发生支原体污染,但又不愿丢弃,希望继续培养(如已转染或大量扩增的细胞)的情况。
使用时需要采用悬浮冲洗法,并连续培养三代。具体流程如下:
据研究表明,约98%的支原体存在于细胞表面和细胞间隙。细胞传代时,用干净的PBS反复悬浮冲洗,就能把70%以上的支原体冲下来。
支原体直径在180~350nm之间,远远小于细胞直径。通过低速离心,很容易将细胞和支原体分离,弃上清即可祛除大部分支原体。
2. 支原体祛除剂Mynox® Gold(细胞保种用)
它含Mynox®和抗生素。Mynox®直接杀灭支原体,而非抑制。它适合珍贵细胞或不易获得的生物样本(如细胞种子)Mynox® Gold细胞毒性在5%以下,作用较温和,细胞需培养治疗4代。它尤其适合原代细胞和难养细胞的支原体的祛除。
3. 支原体祛除剂Mynox®(珍贵样本用)
它适合珍贵细胞、不易获得的生物样本或病毒收获液。
它和Mynox® Gold的区别是:它所含的Mynox®浓度比Mynox® Gold高,细胞毒性为5%~80%(具体看细胞类型),只需治疗1次(≤3小时),即可根除支原体。它更适合容易生长的细胞。
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