含有目的基因真核表达pEGFPC1载体的构建实验

实验方法原理	转化过程所用的受体细胞一般是限制修饰系统缺陷的变异株，即不含限制性内切酶和甲基化酶的突变体（Rˉ，Mˉ），它可以容忍外源DNA分子进入体内并稳定地遗传给后代。受体细胞经过一些特殊方法（如电击法，CaCl₂）处理后，细胞膜的通透性发生了暂时性的改变，成为能允许外源DNA分子进入的感受态细胞（Competentcells）。进入受体细胞的DNA分子通过复制，表达实现遗传信息的转移，使受体细胞出现新的遗传性状。将经过转化后的细胞在筛选培养基中培养，即可筛选出转化子（Transformant），即带有异源DNA分子的受体细胞）。
实验材料	重组质粒
试剂、试剂盒	SOC液体培养基 LB 液体培养基 JM109 DH5 α Amp Kan
仪器、耗材	LB平板
实验步骤	1. 100 ul感受态细胞在冰中融化。 2. 分装2管，50 ul/管。 3. 加入转化的DNA Xul。 4. 冰中放置30 min。 5. 42 ℃放置90 sec。 6. 冰中放置2～3 min。 7. 加入4倍体积的SOC液体培养基或LB液体培养基。 8. 37 ℃振荡培养1 hrs。 9. 涂平板，37 ℃温箱培养12～16 hrs。展开
注意事项	1. 加入DNA的量要小于10 ng，DNA的量过高影响转化效率。 2. SOC培养基可以用LB培养基替代，但是转化率低于使用SOC培养基。 3. 热激温度42 ℃一定要准确，否则影响转化效率。