实验所需「材料」、「试剂」、「耗材」具体见「其他」
1. 吲哚测试和标准曲线
把 0.25 ml 吲哚溶液（用 0.1 mol/L pH 7.0 的磷酸钾稀释母液）、10 ul 5 mol/L KOH 和 1 ml 甲苯分别加入到 1.5 ml 反应杯中。充分摇晃反应杯，然后离心 5 min。取 0.2 ml 上层的有机相加到一个新的反应杯中，并加入 1.2 ml 稀释的 Ehrlich's 试剂。样品混合后在室温下可放置 20 min，用分光光度计在 572 nm 或 578nm 下测样品的吸光度。用 0.25 ml 0.1 mol/L pH 7.0 的磷酸钾代替吲哚做空白对照。
标准曲线通过 10 个不同的吲哚浓度和 1 个空白对照绘制出，由标准曲线可读出透析实验中不同的吲哚浓度。
2. 透析膜的处理方法
在实验前必须先将透析膜切成足够大的小片，使它能完全覆盖透析单元间的空腔。由于透析袋是双层的，所以必须先将透析袋从侧面切开。在使用膜片前需要先在加了 EDTA（约 5 mmol/L ）的水中煮上 5 min 来完全去除重金属离子。然后用水洗透析膜，再放在透析单元中间。为了使透析膜保持湿润，在插入膜片后应迅速使透析单元充满溶液。
3. 最少透析时间的确定
准备十个透析单元，每个单元都由两部分组成，中间以透析膜隔开。每个单元右边的小室加 1 ml 5×10-4 mol/L 溶于 0.1 mol/L pH 7.0 磷酸钾的吲哚溶液，左边的小室加 0.1 mol/L pH 7.0 磷酸钾溶液。此步操作必须迅速，然后固定到旋转器上开始透析。在一定的时间间隔后，从第一个透析单元左右两边各取出 0.25 ml 的样品，在第二个同样的时间后再从第二个透析单元取同样的样品，依次类推，直到取完所有的透析单元的样品。所有的样品，连同透析前的初始吲哚溶液一同用于吲哚测试以决定浓度。左右两边样品的吸收值分别对时间作图，作出两条曲线，两条曲线相交处的时间可以作为最小透析时间，用于下面的实验。实验的时间间隔和总的时间依赖于特定的透析条件，特别是透析设备。通常应该在 2 h 内达到透析平衡，这也是实验的总时间。由于配体浓度呈指数改变，推荐使用不同的时间间隔，在实验开始时时间间隔短，在实验快结束时采用长的时间间隔。
4. 吲哚与血清白蛋白结合的测定
与上面一个实验一样至少准备 10 个透析单元。在每个圆柱体的一侧（比如右侧）加 1 ml 0.1 ml 的牛血清白蛋白（溶于 0.1 mol/L pH 7.0 的磷酸钾中）。另一侧（左侧）加满吲哚溶液，浓度范围为 2×10-5～2×10-3 mol/L 在实验前把溶液稀释好。通常结合实验的终浓度（即吲哚在两侧分布引起的双重稀释）应平均地分布在一个范围内，一个数值在分离常数以下，一个在以上（吲哚 Kd＝0.08 mmol/L ）。但是由于这些浓度与平衡中的自由成分 ［A］ 相关，为了分享结合成分，必须使用适当高浓度的配体。透析必须在常温下进行（25℃）。在透析结束（确定的最小渗透时间加上 30 min，要确保渗透平衡和蛋白已结合）后，所有小室溶液耗尽，从而确定吲哚浓度。
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