哺乳动物中制备基因组DNA实验

动物组织

PBS 乙酸铵 乙醇 酚 氯仿 异戊醇 TE

离心机 摇床 研钵

1.  切下组织并立即剪成小块，置于液氮中冻结。

2.  将200 mg~1 g 的组织用预冷的研钵和研杵研碎，或用锤子将其捣为细粉末，每100 mg 组织用1. 2 ml 消化缓冲液悬浮。
 

3.  500 g 离心细胞5 min，弃上请。贴壁生长细胞先用胰酶消化。

4.  细胞用1~10 ml 冰冷的PBS重悬，500 g 离心5 min，弃上清，重复1次。

5.  用1体积 的消化缓冲液重悬细胞。

6.  将样品在盖紧的管中于50℃摇荡下温育12~18 h。

7.  用等体积的酚/氯仿/异戊酵抽提样品，1 700 g 离心10 min。

8.  如果样品溶解得不好， 再加1体积不含蛋白酹K的消化缓沖液，并重复离心。

9  如果在界面上有一层厚的白色物质，重复有机抽提，将上层（水溶液）转移至一个新管中。

10.  加入1/2体积7.5 ml 乙酸铵和2体积100%乙醉，1 700 g 离心2 min。

11.  用70%乙酵洗涤，晾干，沉淀用TE。

12.  缓冲液重新溶解，使终浓度在约1 mg/ml 左右。

1.  如果是用肝组织，要除去胆囊，因其含有高水平的各种消化酶。