1. 噬菌体的检查：
① 样品采集
将2——3g土样或5mL水样（如阴沟污水）放入灭菌三角瓶中，加入对数生长期的敏感指示菌（大肠杆菌）菌液3——5mL，再加20mL二倍肉汤蛋白胨培养液。
② 增殖培养
30℃振荡培养12——18h, 使噬菌体增殖。
③ 离心分离
将上述培养液以3000rpm离心15——20min，取上清液，用pH7.0，1%蛋白胨水稀释至10-2——10-3，用于噬菌体检查及效价测定。
④ 生物测定法：
双层琼脂平板法；
倒下层琼脂，融化下层培养基，倒平板（约10mL/皿）待用。
倒上层琼脂
融化上层培养基，待融化的上层培养基冷却至50℃左右时，每管中加入敏感指示菌 （大肠杆菌） 菌液0.2mL，待检样品液或上述噬菌体增殖液0.2——0.5mL，混合后立即倒入上层平板铺平。
恒温培养：30℃恒温培养6——12h观察结果。
观察结果：如有噬菌体，则在双层培养基的上层出现透亮无菌圆形空斑噬菌斑。
单层琼脂平板法
省略下层培养基，将上层培养基的琼脂量增加至2%，融化后冷却至45℃左右，如同上法加入指示菌和检样，混合后迅速倒平板。30℃恒温培养6——16h后观察结果。
⑤ 离心分离加热法（快速检查）
取大肠杆菌正常培养液和侵染有噬菌体的异常大肠杆菌培养液，4000rpm离心20min，分别取两组发酵液的上清液（A1），一部分于721分光光度计上测定OD650光密度值，另外各取5mL上清液于试管中，置水浴中煮沸2min（A2），检测A2溶液OD650光密度值，记录结果。
2. 噬菌体效价的测定：
① 倒平板
将融化后冷却到45℃左右的下层肉膏蛋白胨固体培养基倾倒于11个无菌培养皿中，每皿约倾注10mL培养基，平放，待冷凝后在培养皿底部注明噬菌体稀释度。
② 稀释噬菌体
按10倍稀释法，吸取0.5mL大肠杆菌噬菌体，注入一支装有4.5mL1%蛋白胨水的试管中，即稀释到10-1，依次稀释到10-6稀释度。
3. 噬菌体与菌液混合：
将11支灭菌空试管分别标记10-4、10-5、10-6和对照。分别从10-4、10-5和10-6噬菌体稀释液中吸取0.1mL于上述编号的无菌试管 中，每个稀释度平行做三个管，在另外两支对照管中加0.1mL无菌水，并分别于各管中加入0.2mL大肠杆菌菌悬液，振荡试管使菌液与噬菌体液混合均匀， 置37℃水浴中保温5min，让噬菌体粒子充分吸附并侵入菌体细胞。
4. 接种上层平板：
将11支融化并保温于45℃的上层肉膏蛋白胨半固体琼脂培养基5mL分别加入到含有噬菌体和敏感菌液的混合管中，迅速搓匀，立即倒入相应编号的底层培养基平板表面，边倒入边摇动平板使其迅速地铺展表面。水平静置，凝固后置37℃培养。
5. 观察并计数：
观察平板中的噬菌斑，并将结果记录于 计算公式：N=Y/V%×X
（N：效价值，Y：平均噬菌斑数／皿，V：取样量，X：稀释度） 展开 | 