固定化酶到聚酯的实验

聚酯是通过二羧酸和二醇试剂的缩合合成的。频繁使用的聚对苯二甲酸乙二醇酯（PET，Terylene，Trevira，Diolen）是通过对苯二酸盐和乙烯乙二醇的缩聚形成的，在这两步过程中三氯化锑作为催化剂（图 1）。用过量的乙烯乙二醇，最初形成一个低分子质量的具有末端竣基的聚合物再通过乙烯乙二醇的分裂转变为一个大分子的聚合物。

图 1　聚酯是通过对苯二酸盐和乙烯乙二醇的缩聚反应而形成的。两分子的乙烯乙二醇与二甲基苯二酸盐以三氧化锑作为催化剂进行反应形成低分子的多聚物（n），通过乙烯乙二醇的分裂转变为大分子的聚合物（m）　

由于聚酯无极性的表面所以它不适合作为酶固定的支持物。聚酯和黏性纤维（Rayon）的共聚物更适合这些纤维素的成分增加了亲水的特性，并且为固定化提供了羟基。这个步骤描述了聚酰胺的固定过程，如 CH-酸原子的烷化或部分水解，这些都适用于聚酯。

酶溶液

二氯甲醇己二胺二环己基碳二亚胺磷酸钾NaCl

吸滤器玻璃料聚酯小片

1. 用二环己基碳二亚胺酸解和活化

如上所述，准备确定大小的合成的无纺聚酯材料的小片（如 10 片，大小 20 mm×20 mm）。聚酯的蚀刻和水解的发生见「共价固定化酶到聚酰胺实验」的描述。自由羧基的活化是在 50 ml 溶有 10 g/L 环己二胺和 10 g/L 二环己基碳二亚胺的二氯甲醇溶液中于 10℃ 孵化 4 h 来完成的。游离的环己二胺在吸滤器或玻璃料上用二氯甲醇、丙酮和冰水各 10 ml 冲洗去除。

2. 酶与有活性聚酯的结合

在冲洗后，聚酯小片被立即放入酶溶液中（酶溶液的体积要能使聚酯小片完全浸没，如 10 ml）在 4℃ 孵化 3 h。未被固定的酶在玻璃料上用溶有 0.5 mol/L NaCl pH 7.5 的磷酸钾缓冲液反复冲洗去除。其后，用 0.1 mol/L pH 7.5 的磷酸钾冲洗来降低高盐浓度。固定化酶的小片可以在 4℃ pH 7.5 的 0.1 mol/L 磷酸钾中短暂储存（大约一周），若要长期储存，小片需要用水冲洗去除缓冲液，并在空气中干燥（这个过程对于敏感的酶是不能忍受的）。