固相微萃取GCMS／MS方法应用（三）

10.4 串联MS/MS检测

使用TSQ Quantum XLS三重四极杆质谱仪（Thermo FisherScientific, Austin, TX USA）进行质谱分析。

离子化模式：电子碰撞（EI）正离子，电离能70 eV发射电流：30 μA

离子源温度：250℃

扫描方式：选择性反应监测（SRM）

循环时间：0.1 s

峰宽：Q1/Q3 半峰高宽（FWHM）为0.70 Da

碰撞气体(Ar)压力：1.0 mTorr

用于目标化合物和内标化合物的选择性反应监测分析的参

数见表3。

11. 结果计算

11.1定性分析

根据对应标准样品的保留时间(±0.05%)，可确定离子对离子（定性和定量离子）的存在。在多重反应监测（MRM）模式中，测得的样品中定性离子对定量离子的峰面积之比应当接近(±20%)于标准样品中的定性离子对定量离子的峰面积之比，可参阅表3。定性离子和定量离子，是根据所选择的母离子产生的子离子的峰强度来选择的。

11.2 定量分析

本方法使用与每种基质匹配的内标化合物的峰面积比进行定量分析。二己基甲醇被用作其中6种调味品化合物（即，侧柏酮、薄荷呋喃、草蒿酮、胡薄荷酮、甲基丁子香酚和β-细辛脑）的内标化合物。香豆素-d4被用作香豆素的内标化合物。根据被测物质对内标化合物的相对峰面积对被测化合物的浓度作校正曲线。样品中调味剂的浓度（cf）由下式进行计算：

12. 方法验证

根据方法的特异性、线性、精密度、检出限（LOD）和定量限（LOQ）、准确度和适应性验证了该方法。最后，经证实，本方法可以很好地应用于检测大量商业化食品中的目标调味剂。通过在空白基质（固体样品：燕麦粥；半固体样品：纯番茄酱汁；液体样品：乙醇水溶液）中加入目标化合物的加标实验测试了该方法的性能。

12.1 特异性

使用选择性反应监测（SRM）方法，通过与对应的标准样品对比，样品中离子对离子（定性和定量）的色谱保留时间是否在正确的时间出现，确认了该方法的特异性。如表3所示，该方法实际测得样品中定性离子对定量离子的峰面积之比与标准样品中的定性离子对定量离子的峰面积之比接近。

12.2 线性和校正曲线

对于6种调味剂在0.01–2.0 mg/kg和香豆素在0.1–2.0 mg/kg范围之间评价了校正曲线的线性。所有情况下，线性相关系数都大于0.99。将7种与基质匹配的校正标准物质重复添加到每个批次的试验样品中，进而得到了校正曲线。

12.3 精密度

通过在三种不同基质中添加两个浓度水平的（内标）样品，分别重复测定6次得到该方法的相对标准偏差（%RSD）。对于液体基质样品，选择乙醇水溶液（40%）作为空白基质（并添加不同含量的蔗糖，以模拟酒类和能量型饮料）；对半固体基质样品，选择番茄酱汁作为空白基质；对固体基质样品则选择燕麦粥为空白基质样品。添加样品的浓度为0.1和1 mg/kg，每个样品重复分析6次。对6种调味剂（β-细辛脑、草蒿酮、薄荷呋喃、甲基丁子香酚、胡薄荷酮和侧柏酮），添加的第一个浓度水平为0.1 mg/kg，而添加的香豆素的浓度为1 mg/kg。对6种调味剂的第二个浓度水平为1 mg/kg，而对香豆素仍然选择较高的浓度水平10 mg/kg。表4给出了该方法的精密度测定结果，相对标准偏差（RSDs）在2-21%之间。由此可知，该方法对液态和半液态食品的精密度优于固态食品，但是所有精密度结果对于（质量）监管分析方法而言都是可以接受的。

12.4检出限（LOD）和定量限（LOQ）

按照IUPAC方法，估算了该方法的检出限和定量限。即分析空白样品获得该方法的噪声水平，进而用信噪比的3倍和10倍分别代表LODs和LOQs。表5列出了该方法对于三种不同基质（固体、半固体和液体基质）的LODs和LOQs。对于所有的情况，该方法的LODs和LOQs值都优于食品管理限值中规定的0.5 mg/kg的最低控制水平。

12．5 准确度

通过比较实验测定的样品浓度和添加的标准物质的实际浓度评价了该方法的准确度。使用优化的方法分析了三种基质样品。用加标的40%乙醇水溶液代表液体基质样品，加标的番茄酱汁代表半固体基质样品，加标的燕麦粥代表固体基质样品。在6次重复试验中，添加了0.1和1 mg/kg的2个浓度水平的内标。对6种调味剂（β-细辛脑、草蒿酮、薄荷呋喃、甲基丁子香酚、胡薄荷酮和侧柏酮），添加内标的第一个浓度水平为0.1 mg/kg，而添加的香豆素的浓度为1 mg/kg。对6种调味剂，添加的第二个浓度水平为1 mg/kg，而对香豆素仍然选择较高的浓度水平10 mg/kg。如表6所示，除了固体基质样品为正误差外，该方法均具有良好的准确度。

13．结论

单一的实验室分析结果确认了该方法能用于复杂食品中有含量限制的七种具有生物学活性的调味剂含量检测。基于所选择的液体、半固体或固体基质类别的通用方法和每种类型食品对应的优化的分析测试条件，该方法可适用于所有类型的食品中具有生物学活性的调味剂的含量分析。该方法具有足够高的灵敏度，可满足食品行业对调味剂含量的质量监管的需求；使用MS/MS检测器，基于检测离子比，可保证该方法高度可靠的、准确的对化合物进行定性鉴定。因此，我们推荐该方法用于食品行业中具有生物学活性的调味剂的强制限值检测分析。