培养细胞的染色实验

Giemse 甘油 甲醇 Sorensen

滴管 玻璃片

1.  染液制备

（1）称Giemse粉0.5 g、甘油22 ml，在研钵内先用少量甘油与Giemsa充分混合，研磨至无颗粒；

（2）再将剩余甘油混在一起；56 ℃保温2 小时后，加入33 ml纯甲醇，保存于棕色瓶内。

2.  染色步骤（以盖片培养法或涂片法为例）

（1）用pH6.8~7.38的Sorensen缓冲液，按1：9 比例取Giemsa染液和Sorensen缓冲液混合配成染色液；

（2）细胞标本用甲醇固定10 分钟，或1：3醋酸/甲醇固定30 分钟，用滴管把染色液布满玻片上（注意不要有气泡，用染色缸染色亦可）；

（3）染10~15 分钟后，用自来水冲去玻片上多余的染料，空气干燥、二甲苯透明、光学树脂胶封固。

3.  结果

胞核染成紫红色或蓝紫色，胞浆染成粉红色。

1.  染色液宜现用现配，保存时间最好不超过48 小时，旧染液染色效果不好。

2.  Giemsa 对pH 极敏感，缓冲液pH 值要调准确，否则染色效果不好。

3.  用染色缸染色时，随染色时间的延长，在染液表面常形成一层氧化膜（发亮），这层氧化膜易附在片上形成污秽，且不易除掉。因此在用染色缸染色，尤其用的不是现配者时，染色前应先用小片滤纸刮除液面的氧化层再进行染色。

4.  染色完毕，应把标本浸入水中洗除染液，或用自来水直接冲掉多余染液。