培养细菌注意哪些事项

(一) 病料采集和运送　对动物进行病原菌检疫，病料的采集和运送是否得当，是关系到能否分离到病原菌的关键。首先充分了解各种病原菌（目的菌）在被检动物体内及其分泌物和排泄物中的分布情况，不同的病原菌在患病动物体内分布情况不同，即使是同一种病原菌，在病的不同时期和不同的病型中分布也不同。在采取病料前必须对被检动物可能患有何种疫病作出初步诊断。采取病料所用器械和宣传品器都应事先消毒，确保无毒，采样时应无菌操作。如果动物已死亡，取样应注意以下几点：⑴ 对急性死亡的动物，从耳尖或四肢末梢血管取血制成涂片，染色镜检，在排除炭疽后方能剖检取样；⑵ 采取病料时间，原则是越早越好，夏季要在动物死亡后2小时内采取病料；⑶ 为了提高病原微生物的阳性分离率，采取的病料要尽量可能齐全，除了内脏、淋巴结和局部病变组织外，还应采取脑组织和骨髓，以防遗漏；⑷ 认真填写好病料送检单和剖检病理变化记录。下面介绍病料的采取方法。

1. 脓汁　先将表面流水线，然后以灭菌注射器或吸管抽取深部的浓汁；若是开口化脓灶或皮肤、粘膜表面化脓，可用灭菌棉拭子浸沾脓汁后，放入试管中。

2. 内脏器官　采取心、肺、肝、脾、肾等有病变的组织及其淋巴结，无病变时也要采取，无菌剪取1－2cm大的方块，分别装入灭菌容器内。

3. 血液　要全血时，无菌采取血液10m，立即注入盛有含0.5％肝素溶液0.1ml或5%柠檬酸钠液1ml的灭菌试管内，并立即混合均匀。要分离血清时，将无菌采取的血液直接注入灭菌试管，待血液自然凝固后分离血清。从尸体采取血液时，可用灭菌注射器或吸管从右心房抽取。

4. 皮肤和粘膜　采取病变局部的皮肤和粘膜及其所属淋巴结，放入甘油盐水溶液中。

5. 脑和脊髓　无菌采取脑的脊髓约1－2cm大的方块，放入甘油盐水溶液中。

6. 胆汁　用灭菌注射器抽出后放入灭菌试管中。

7. 肠和胃　剪取有病变的部位一段或一块。也可将肠管一段（约6－8cm）用线扎紧两端后剪下送往实验室。

8. 粪便　可用棉拭子插入肛门沾取，或扑杀病畜后由肠管采取，立即放低温条件下保存。

9. 乳汁　先用消毒yao液洗净乳头及其附近，弃去最初挤出的几滴乳汁，然后采取乳汁约10ml放入灭菌试管内。

10. 流产胎儿　可将整个胎儿用塑料薄膜包紧，装入箱中送检。

11. 小动物、禽和鱼等可按上述流产胎儿方式整体送检。在距离实验室很近，又有隔离运输条件时，也可将发病小动物直接送检。

(二) 病料的处理　采集的病料，在接种培养前，应对其性状进行观察，例如：是否脓性带血或腐败，有何异味，并作记录。各种病料在分离培养前均应制备一张涂片，作革兰氏染色、镜检，以了解细菌的形态、染色特性，并大致估计其含菌量。通过肉眼观察和显微镜下看到的结果，对病料中可能含有的病原菌作最初步的估价。

如果病料是病变组织，又是用无菌方法采集的，在接种前一般无需作特别处理。但如果病料被杂菌污染严重，则需根据要分离的病原菌的特性，采用一些对病原菌无害，但对杂菌有杀灭或抑制作用的方法，以抑制杂菌生长。例如从粪便中分离沙门氏杆菌，可将粪合接种于亚xi酸钠肉汤中，作增菌处理。在这种培养基中，其它杂菌被抑制，而沙门氏杆菌则能自由繁殖。又如，分离布鲁氏杆菌、胎儿弯曲杆菌、炭疽杆菌、副结核杆菌可用选择性抗菌琼脂。分离链球菌和猪丹毒杆菌用叠氮钠结晶紫血琼脂等。如果从肠道内容物或从污染有不产生芽胞的杂菌培养物中分离能形成芽胞的细菌（如魏氏梭菌、破伤风梭菌等），可将病料在80℃加热15分钟，以杀死不形成芽胞的杂菌，取此材料再接种培养基，即容易获得纯培养物。有些病料（如奶、尿等）含菌太少，则应先作集菌处理，然后接种，以提高检出率，其集菌方法有离心法和过滤法。离心法取沉淀物作培养物；过滤后取沉积于滤板上表面的病料作培养。还有些细菌往往在细胞浆内集结成团，在它们所形成的病灶中含菌较少，遇到这种情况，可将病料组织磨碎，制成乳剂，加入酶、酸或碱，消化组织，使菌团散开，然后离心，收集沉淀物作培养（如从肠粘膜分离副结核杆菌即用此法）。