由于CCD的使用,红带在600-700 nm波长范围内收集信号。每种情况等离子共振耦合的增加都导致红带强度整体的增加。用像素原理对图1活细胞图像进行一个像素的分析,并与一个数据z-测试显示的三种分布相比较。

图5 代表EGFR调控阶段分布的活细胞伪颜色图像
对图1显示的延时图像色彩统计分析决定了要为EGFR的分布标定颜色—未处理细胞(A)、用10
μM
AG1478处理的细胞(B)。蓝色表明EGFR位于胞质膜的可能性很高,绿色表示位于早期胞内体,红色表示位于晚期胞内体/MVB。注意AG1478处理明显地降低了EGFR的内吞作用。A图最右边的箭头表明丝线来自邻近的细胞,显示了围绕其轴线的大量EGFR交易。
与以前的用荧光标记的研究(例如量子点46)相比,等振离子纳米粒子的使用提供了邻近纳米级别生物分子组织的附加信息。已经证实,与粒子间距相对应的光学变化可以被精确地量化,而且为纳米粒子连接物开发一个类似的量化模型40工作正在进行。
这里描述NPRC的应用可以扩展到其他的RTK和涉及信号转换的G蛋白耦合受体33。其它调控分子的系统包含整合蛋白群集免疫学突触形状的信息。如果相互作用的分子被标定显示明显光学特征的等离振子纳米粒子,这种方法可以用来探测异性分子的交互作用,例如探测不同RTK间的交互作用。这里的理论模拟可以用来优化纳米粒子的设计,这种设计在单一异性交互作用的情况下将产生明显的光学变化。
作为生物感应工具NPRC主要的优点是联系着等离子纳米粒子装配的复杂光学反应。观察下,组织中与纳米级别变化有关的光学特征数据的改变促进了生物进程统计联系的发展。为其作为一个定量生物感应工具的发展,进一步了解NPRC是非常重要的。粒子形状的不均匀性以及纳米粒子聚合物对光谱特征的微妙影响(例如散射波峰宽度)还在研究当中,有望能够揭示大量的有用的附加信息。
NPRC可以被用作独立的方法,也可以整合到先前使用过的生物物理方法上(例如FRET,1,4 ICM,2,3 或者 EM5)来提供附加的完善信息。有免疫金标签的TEM已经被用在研究固定样品高分辨率的三维蛋白质组织。这里使用的方法是将TEM图像扩展到活细胞动态光学图像,这些影像是分子组装(关于邻近和纳米级别生物分子组织)的清晰信息。然而对那些不要求超分辨率的方法,NPRC可以提供描述辅助衍射特征的能力,排列距离超过成千上万纳米,这明显超过了FRET的有效距离。此外,NPRC展现了其对蛋白质族几何特征的敏感性,例如活细胞图像中平面二维和立体三维聚合物,并且能够实时的追踪族的活力。
NPRC对纳米级别的个别群簇的敏感性可以提供潜在的非常有价值的补充总体种群测量值信息,例如ICM方法可以提供群密度、每个种群受体的平均数量。而且,纳米粒子本身也可以成为ICM极好的探针,因为其亮度和耐光性都可以促进这些技术的直接联合。我们预期NPRC将会不断引起生物及生物医药研究者的兴趣,这种方法对生物分子内作用有独特的洞察力。