基于适配体构建百草枯残留检测免疫新方法

近日，贵州大学Liu等人成功地制备了一种灵敏度高、选择性好、稳定性好的百草枯层析试纸条(CS)。与以前报道的基于免疫分析的层析纸条不同，该研究使用了聚二烯丙基二甲基氯化铵(PDDA)作为T线上的强大捕获分子，可以使制备的CS在储存过程中具有很高的稳定性。同时，使用百草枯PQ-15适配体，它是一种用于检测的良好识别分子。该方法不仅使制备的壳聚糖更具成本效益和稳定性，而且为百草枯的选择性检测提供了快速、简便的优势。CS的线性范围为20~150 μg/L，检出限低至428 μg/L。此外，CS能用肉眼定量分析浓度大于30 μg/L的百草枯，检测过程可在3分钟内完成。

原理示意图

用透射电子显微镜对所制备的纳米颗粒和纳米复合材料的形貌进行了表征。AuNPs是均匀分散的颗粒，尺寸为10-15 nm。经适体修饰后的AuNPs(如箭头所示)的表面显示了明显的膜性物质。此外，为了进一步证明AuNPs与适配子之间的反应，对样品进行了凝胶电泳法分析，并用紫外光激发成像观察了核酸的荧光。图C中的图像显示AuNP-适配子(第4道)的相对分子质量大于单独的适配子(第2道)，这表明AuNP-适配子复合体成功形成。同时，AuNP-适配子的样品以单一尖锐条带的形式迁移。可以推断AuNP-适配子纳米颗粒的迁移率是相似的，这表明每个金纳米颗粒上的适配子分子数量大致相同。如图D所示，由于表面有大量的柠檬酸根离子，AUNPs显示出-49.43 mV的高度负电荷，而负电荷为-6.14 mV的核酸适体(PQ-15)占据了AuNPs的表面，使其负电荷降至-3.17 mV。

ImageJ分析T线和C线的检测结果图像和定量检测结果(A)与不同测试条T线的颜色强度(B)

该方法与先前报道的基于免疫测定的层析方法不同，使用聚（二烯丙基二甲基氯化铵）（PDDA）作为T线处的捕获分子，储存期间具有高稳定性。同时，PQ-15适体被用作制备的CS中百草枯检测的优良识别分子。该策略不仅使制备的CS更具成本效益和稳定性，而且为选择性百草枯检测提供了快速简便的优势。CS表现出20-150 μg/L的宽线性范围和低至4.28 μg/L的检测限。此外，CS能够通过肉眼对大于30  μg/L的百草枯浓度进行定量分析，检测过程可在3  min内完成。因此，所制备的CS可广泛用于农产品中农药残留的检测。