基因工程的载体2

2、pUC质粒载体

1987年，J.Messing和J.Vieria采用MCS技术在pBR322基础上构建的。

结构：

（1）来自于pBR322的Ori

（2）氨苄青霉素的抗性基因(ampr)。 但核苷酸序列发生了变化

（3） LacZ′基因

编码β—半乳糖酶的α—肽链即氨基末端。

（4）MCS区段

是一段用于插入外源DNA片段的特定区域，由一系列的紧密相连的限制性内切酶位点组成，而且每个限制性内切酶位点在整个载体中是唯一的。

与pBR322相比， pUC质粒载体优点：

（1）具有更小的分子量和更高的拷贝数

如pUC8为2 750bp，pUCl8为2 686bp，控制质粒复制rop基因的缺失，平均每个细胞即可达500～700个拷贝

（2）适用于组织化学法检测重组体

通过a-互补作用，利用菌落颜色筛选重组子。

（3）具有多克隆位点区段（MCS）

可以定向克隆防止载体自我连接。

二、噬菌体载体

（一）l噬菌体载体

1. 噬菌体的生物学特性

烈性噬菌体：只具有溶菌生长周期

温和噬菌体：具有溶源生长周期和溶菌生长周期

溶菌周期指噬菌体将DNA注入寄主细胞后很快环化，然后进行自我复制、蛋白衣壳合成和新噬菌体颗粒的组装，最后使寄主细胞破裂而释放出大量的子代噬菌体。

溶源周期中，注入寄主细胞的噬菌体DNA是整合到寄主细胞染色体上并可以随着寄主细胞的分裂而进行复制。

整合了一套完整的噬菌体基因组的细菌被称为溶源性细菌。在溶源性细菌内存在的整合或非整合的噬菌体DNA被称为原噬菌体。

2. l噬菌体的生物学特性

⑴组成：蛋白质外壳和线状双链DNA分子组成。

lDNA长度为48502bp，在分子两端各有12个碱基的单链互补粘性末端。当其注入到寄主细胞中后，可以迅速通过这两个粘性末端的互补作用形成双链的环形DNA分子。上述通过粘性末端互补形成的双链区被称为cos位点（cohesive end site）.
⑵是一个温和噬菌体

一般以溶源生长进行增殖，胁迫条件下也会进入溶菌生长周期。

⑶复制

溶源周期随溶源细菌染色体一起复制

溶菌周期的早期是“θ”复制，晚期进行滚环复制