基础培养基的制备

培养基是根据微生物  生长繁殖时对营养物质的需要而配制的营养制品，含有营养物质及适宜的酸碱度，经灭菌后使用。

常用的培养基按用途分为：基础培养基、营养培养基、鉴别培养基、选择培养基及厌氧培养基。按物理性状分为固体、半固体和液体三种。

实验目的：

了解常用的液体、固体、半固体培养基的成分、制备方法和用途。

实验材料：

牛肉、蛋白胨、氯化钠、琼脂  、0.1mol/lNaOH溶液、酚红指示剂、蒸馏水等。

实验方法：

一、肉汤培养基

1、 将鲜牛肉除去筋膜和脂肪，切成小块后用绞肉机绞碎，以每500g碎牛肉加1000ml蒸馏水的比例混合后，置4℃冰箱过夜。

2、 次日取出浸泡物倒入容器内煮沸半小时，使肉渣凝固，也可煮沸一小时不经冰箱过夜。

3、 用纱布和脱脂棉过滤，除去肉渣，即成肉浸汁。加入1%蛋白胨及0.5%氯化钠，加热溶解并用蒸馏水补足蒸发失去的水分。

4、 待冷至50℃左右时，调该溶液的pH至7.4~7.6。校正pH的方法为：①取三支与标准比色管（pH7.6）相同的空比色管，其中一管内盛放蒸馏水5ml；另外两管各加入欲测的肉汤培养基5ml，其中一管内加0.02%酚红指示剂0.25ml（滴定管），摇匀。②按图2所示排列，举起比色架，对光观察。若滴定管色调较淡或为黄色，即表示培养基偏酸性，需滴加0.1mol/L NaOH矫正；若呈深红色，即表示偏碱性，应滴加0.1mol/L HCl矫正；使之与标准比色管色泽相同为止。通常未矫正前的肉汤均呈酸性。记下用去的NaOH（或HCl）溶液量，由此计算出矫正全量培养基时所需NaOH（或HCl）溶液量。

1、 酸碱度矫正后，加热煮沸10分钟，用滤纸过滤，补足水分，再调一次pH值。

2、 分装肉汤于三角烧瓶或试管，瓶口、管口加棉塞并用纸包扎。

3、 置高压灭菌器内103.43Kpa20分钟灭菌备用。

可用市售的牛肉膏代替牛肉，用量为0.3%，其余成分相同（如蛋白胨、氯化钠等）加热溶解，调节pH至7.6左右，煮沸10分钟，补充失水、过滤、分装，灭菌后备用。

二、固体培养基

1、在上述制备的肉汤中加入2-3%的琼脂。琼脂为海藻中提取的一种多糖类物质，本身无营养作用，不能被细菌  利用。因其加热到100℃后可溶化，冷却至40℃左右又可凝固，故可作为赋形剂。加热溶化，脱脂棉过滤，补足失水，分装三角烧瓶和试管。

2、置高压灭菌器内103.43Kpa灭菌20分钟，取出后趁热将试管倾斜一定角度放置，待琼脂凝固即成琼脂斜面培养基（图3）。三角烧瓶内培养基冷至50-60℃时在超净台或无菌室内将其倾注于灭菌平皿内（15-20ml），凝固后即成琼脂平板。

另外，实际工作中现多使用合成营养琼脂干燥粉末制剂。其方法为：称取41克营养琼脂干燥粉末加入1000ml冷蒸馏水中混合放置10分钟，隔石棉铁丝网微火煮沸使其完全溶解，分装于中试管中（约5~7ml）或三角烧瓶，103.43kPa（121℃）灭菌15分钟，即可备用。

三、半固体培养基

1、操作方法同固体培养基，但琼脂加入量较少，仅0.3-0.5%。

2、分装试管，灭菌后使试管直立，冷凝后即成半固体培养基